Группы крови системы АВ0
Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.
Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).
Первая группа крови - 0 (I)
I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.
Вторая группа крови А β (II)
II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.
Третья группа крови Вα (III)
III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.
Четвертая группа крови АВ0 (IV)
IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.
Группы крови по системе АВО
Методика определения групп крови
Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа определения групп крови по системе АВО:
По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;
С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).
Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам
Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25° С.
Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают из донорской крови в специальных лабораториях. Хранятся сыворотки в холодильнике при температуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то максимальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).
Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные, согласно группам крови.
Изотонический раствор хлорида натрия.
Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).
Техника проведения реакции.
1. Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворотку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать ошибок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).
2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель исследуемой крови величиной примерно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно перемешивают между собой стеклянными палочками с закругленными краями.
Возможна и более простая методика: на тарелку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каждый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.
3. Смешав капли, тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не менее 5 минут, так как возможна более поздняя агглютинация, например с эритроцитами группы А 2 (II).
4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.
Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной
При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невооруженным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет.
Результаты реакций двух серий в каплях с сывороткой одной и той же группы должны совпадать.
Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.
Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).
Определение групп крови моноклональными антителами
Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые получают с помощью гибридомной, биотехнологии.
Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует специфические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, характерна для опухолевой клетки и присущей лимфоциту способностью синтезировать антитела.
Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, применяемые для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.
Техника проведения.
Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После перемешивания компонентов наблюдают за реакцией агглютинации в течение 2-3 минут. Оценка результатов очень проста.
Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выделить три основные группы ошибок: ошибки, связанные с низким качеством реагентов; технические ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыворотке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подобное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.
Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности проводить при температуре 37° С, они исчезают.
Нужно строго помнить, что во всех случаях нечеткого или сомнительногскрезультата следует провести повторное определение групп крови при помощи стандартных сывороток других серий, а также перекрестным способом.
В этой статье речь пойдёт о методах определения группы крови по системе АВ0, а также об экспресс-методе определения резус-фактора.
Сначала поговорим о целях определения группы крови, а также об истории изучения этого вопроса. Интерес к переливанию крови зародился давно. Ещё в Древнем Египте врачи пытались перелить её раненым, больным, умирающим. В основном использовали в качестве доноров молодых животных. Считалось, что они обладают особой природной силой и к тому же не подвержены порокам, как люди. Переливание от человека человеку было чаще всего безуспешным. Причины этого гораздо позже открыл австрийский врач Карл Ландштейнер. Он определил, что у человека находятся различные антигены и антитела, образующие особую иммунную систему.
В настоящее время выделено около пятисот различных антигенов, но на практике группы крови определяют по системе АВ0.По этой системе в состав крови входят :
- агглютиногены А и В (антигены). Локализация – эритроциты;
- агглютинины альфа и бета (антитела). Локализация – сыворотка.
Расположение их в крови :
- Антиген А вместе с антителами альфа;
- Антиген В вместе с антителами бета;
- Только антитела альфа и бета.
Одновременно одноимённые антигены и антитела находиться не смогут, так как их встреча приводит к бурному проявлению т.н. реакции изогемагглютинации, что приведёт к гемолизу (разрушению) эритроцитов и прочим патологическим реакциям.
Техника определения группы крови состоит в применении знания этой особенности.- 1-я группа: отсутствуют агглютиногены, в сыворотке – агглютинины есть;
- 2-я группа: есть А и бета;
- 3-я группа: есть В и альфа;
- 4-я группа: есть А, В, агглютининов нет.
Техника определения
Техника определения группы крови по системе АВ0 основана на визуальном наблюдении агглютинации
.
Проводить исследование нужно при:
Задайте свой вопрос врачу клинической лабораторной диагностики
Анна Поняева. Закончила нижегородскую медицинскую академию (2007-2014) и Ординатуру по клинико-лабораторной диагностике (2014-2016).
Как происходит определение группы крови по стандартным сывороткам? Наверное, наблюдая за действиями лаборанта и за происходящей на специальной планшетке химической реакцией, подобный вопрос задавали себе многие. Ничего загадочного в этом процессе нет, а механизм установления групповой принадлежности основан на реакции агглютинации, которая происходит при взаимодействии компонентов крови агглютиногенов и элементов сыворотки.
Основные характеристики групп
Определение группы по стандартным сывороткам основано на том, что в крови человека содержатся, в различных комбинациях агглютиногены (А и В) и агглютинины (a и b). При встрече одноименных агглютинина и агглютиногена происходит быстрая агглютинация, а на планшетке этот процесс будет выглядеть как распадание однородного кровяного пятна на множество мелких пятнышек.
Для определения группы крови используются сыворотки, содержащие агглютинины различных групп, которые вступают в реакцию с содержащимися на поверхности эритроцитов агглютиногенами:- 0 (I) - содержит только агглютинины a и b;
- A (II) - имеется антиген А и агглютинин b;
- В (III) - есть агглютиноген B и антитело а;
- АВ (IV) - в сыворотке нет антител, а на поверхности эритроцита располагается агглютеногенный комплекс АВ.
Тип крови с помощью стандартных сывороточных растворов определяется в течение 5-10 минут и не требует дополнительной подготовки пациента к исследованию. Этим способом можно исследовать как венозную, так и периферическую кровь, получая одинаковый результат.
В экстренных случаях (подготовка к срочной операции или необходимость немедленного восполнения кровопотери) проводят смешивание, капая кровь из прокола на пальце больного прямо на планшетку с налитыми на нее стандартными сыворотками.
Техника проведения анализа
Для исследования применяется плоская планшетка с углублениями в ней. Углубления расположены по 3 в ряд (имеется 2 ряда) и имеется одно внизу.
Над каждой парой углублений для удобства лаборанта написано I, II или III и для нанесения в ячейки соответствующих стандартных сывороток.
Анализ проводится так:- В первом ряду в соответствующие ячейки наливается несколько капель сывороточного раствора I, II и III вида (в соответствии с наименованием углубления).
- Во второй ряд дублируются аналогичные растворы, но другой серии изготовления (необходимый контроль для избегания ложной агглютинации из-за некачественной сыворотки).
- В растворы стеклянной палочкой добавляются по капле венозной или периферической крови.
- Перемешивание, чтобы избежать случайного повреждения эритроцитов, производится плавным покачиванием планшетки.
- Далее материал оставляется на 5 минут, после чего проводится оценка полученного результата.
Оценивается вид и структура жидкостей по типу раствора, также проверяется соответствие с аналогичным раствором в рядом расположенной ячейке.
Если, к примеру, в одном углублении с цифрой II произошла агглютинация, а в другом с аналогичным реактивом нет, то определение группы крови с помощью сывороточных составов считается неверным. Его необходимо повторить, используя сыворотки 2 других серий.
Оценка результатов
Тип крови стандартными сывороточными реактивами определяется на основании видимой реакции агглютинации, и результат может быть следующим:
- I - основные и контрольные капли на лабораторной тарелочке остались без изменений.
- II - химическая реакция произошла в ячейках I и III.
- III - наблюдается агглютинация в углублении I и II.
- IV - имеются изменения во всех емкостях лабораторной тарелочки.
При определении IV типа всегда проводится контроль с сывороткой IV, чтобы предотвратить ложноположительный результат. В контрольном смешивании по истечении 5 минут не должно произойти никаких изменений.
Методом определения типа крови при помощи стандартных сывороточных реактивов пользуются почти во всех лабораториях. Быстрый и доступный способ позволяет в течение нескольких минут определит группу.
Полученные данные учитываются только в том случае, когда агглютинация ярко выражена. Слабая химическая реакция может быть из-за старых реактивов или из-за неправильного проведения анализа. Результат не может считаться достоверным. В сомнительных случаях, помимо исследования стандартными сывороточными составами, могут быть сделаны для уточнения группы тесты с цоликлонами или «эритротест».
С помощью стандартных сывороточных составов определение группы возможно за несколько минут. Метод очень прост и не требует от лаборанта специальных навыков.
ИНСТРУКЦИЯ
О технике выполнения манипуляции
«Определение группы крови с помощью
сывороток (по системе АВО) »
по специальностям
2-79 01 01 «Лечебное дело»,
2-79 01 31 «Сестринское дело»
Определение группы крови с помощью
стандартных изогемагглютинирующих
сывороток (по системе АВО)
Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательству.
Материальное обеспечение:
1) две серии стандартных гемагглютинирующих сывороток в специальных штативах;
2) флакон с изотоническим раствором натрия хлорида;
3) маркированные планшеты;
5) пипетка для взятия крови;
6) пипетки для изотонического раствора;
7) песочные часы на 5 мин;
8) перчатки;
9) регламентированный
дезинфектант.
Определение группы крови проводится в помещении с хорошим освещением и
температурой от +15 до + 20 °С. Манипуляцию выполняют в перчатках. При наличии
повреждений на коже медсестра временно отстраняется от работы. В случае
попадания крови на кожу или слизистые проводят обработку по действующей
инструкции.
Последовательность выполнения:
1. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток:
1) по цветовой маркировке;
2) внешнему виду (светлая, прозрачная);
3) сохранности ампулы;
4) наличию правильно оформленной этикетки с указанием группы крови, титра, срока годности, места приготовления;
2. Разместить на столе:
1) два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток трех групп (О, А, В) двух серий и одну ампулу с сывороткой АВ (IV), каждая ампула должна иметь пипетку;
2) флакон с изотоническим раствором, пипетку;
3) стерильный маркированный планшет;
4) предметные стекла (стеклянные палочки);
5) пипетку для взятия крови;
6) песочные часы;
3. Написать на планшете Ф.И.О. больного, группу крови;
4. Надеть перчатки;
5. Нанести на планшет по 1 капле (0,1 мл) стандартных гемагглютинирующих сывороток трех групп двух серий в соответствующие гнезда планшета;
6. Нанести 1 каплю крови из пальца или из пробирки пипеткой в соответствующую ячейку;
7. Поместить в каждое гнездо планшета, рядом с сывороткой, по 1 маленькой капле (0,1 мл) исследуемой крови в соотношении кровь: реагент -1:10 (кровь забирать из большой капли, используя для этого разные стеклянные палочки);
8. Смешать кровь с реагентом, после смешивания планшет осторожно покачать в руках. Добавить по 1 капле 0,9% раствора натрия хлорида к каплям сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация, но не ранее чем через 3 мин;
9. Оценить результат через 5 мин после начала реакции:
1) реакция агглютинации может быть положительной и отрицательной;
2) если сыворотки дали положительную реакцию, значит, кровь содержит оба агглютиногена АВ, в этом случае следует провести дополнительное контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВ (IV);
10. Произвести дезинфекцию отработанного материала.
Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.
Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями; набор стеклянных палочек; изотонический раствор хлорида натрия ; набор гемагглютинирующих сывороток 1, 2, 3, 4 групп двух серий; пипетки; исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки; перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.
Подготовка к манипуляции:
- Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
- Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
- Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.
Выполнение манипуляции:
На белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;
С помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;
Отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;
По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.
Оценка результатов:
а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом - обесцвечивается;
б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;
в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:
1. Если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.
2. Если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.
3. Если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.
4. Если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.
Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.
Окончание манипуляции:
- Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
- Вымыть руки, осушить полотенцем.
Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25 0 С.
