Определение количества тромбоцитов в крови. Подсчет тромбоцитов по методу фонио. Нормы концентрации тромбоцитов

Принцип. Подсчет числа тромбоцитов в разведенной крови в счетной камере с применением фазово-контрастного устройства и расчет их количества в 1 мкл или 1 л крови.

Реактивы: 1) реактив 1: кокаина гидрохлорид - 3 г; натрия хлорид - 0,25 г; фурацилин - 0,25 г; дистиллированная вода- 100мл; 2) реактив 2: 1% раствор оксалата аммония. Раствор кипятят и фильтруют, хранят в холодильнике.

Наиболее быстрый и полный лизис эритроцитов вызывает 1% раствор оксалата аммония.

Ход определения. Для подсчета тромбоцитов предпочтительнее использовать венозную кровь. В качестве антикоагулянта рекомендуется применять ЭДТА (этилендиаминтетраацетат натрия). При взятии капиллярной крови из пальца высока вероятность агрегации тромбоцитов. Перед исследованием необходимо убедиться в отсутствии сгустков крови.

Исследуемую кровь разводят в 200 раз, для этого в сухую пробирку набирают 4 мл реактива 1 или 2 и 0,02 мл крови. Перемешивают и оставляют на 25–30 мин для гемолиза эритроцитов. Подготавливают камеру Горяева и заполняют ее предварительно перемешанной разведенной кровью (см. «Подсчет эритроцитов, лейкоцитов»). Счетную камеру помещают во влажную среду (чашка Петри с уложенной по краям смоченной водой фильтровальной бумагой) на 5 мин для оседания тромбоцитов. Используя объектив 40× с фазово-контрастным устройством, производят подсчет тромбоцитов в 25 больших квадратах счетной камеры.

Тромбоциты выглядят в счетной камере как мелкие, хорошо преломляющие свет образования.

Расчет числа тромбоцитов в 1 мкл крови проводят по формуле:

где X - число тромбоцитов в 1 мкл крови; а - число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших квадратах счетной камеры; 200 - разведение крови; 25 - число больших квадратов; 250–1(1/250) - объем одного большого квадрата, так как сторона квадрата равна 5–1 мм, а высота - 10–1 мм.

На практике число сосчитанных тромбоцитов умножают на 2000. При пересчете на 1 л крови умножают еще на 106.

Примечание. Вся используемая стеклянная посуда и камера Горяева должны быть тщательно вымыты, иначе грязевые и пылевые частицы, сходные по размеру с тромбоцитами, могут быть ошибочно учтены при подсчете.

См. также:

• Подсчет тромбоцитов в мазках крови по Фонио (A. Fonio)
• Тромбоциты

onlab.info

Определение числа тромбоцитов в крови

Число тромбоцитов: микроскопический метод.

.

Определение числа тромбоцитов - важнейший метод исследования, способный обнаружить наиболее частое нарушение гемостатического потенциала крови - тромбоцитопению. В настоящее время для определения числа тромбоцитов имеется несколько лабораторных технологий (автоматизированный, по Фонио и др.). Наибольшую точность имеет микроскопический метод при подсчете в камере, однако этот метод требует от врача-лаборанта опыта, напряжения зрения, концентрации внимания.

Принцип метода

Принцип метода основан на определении числа тромбоцитов путем их подсчета в камере Горяева обычной световой микроскопией или с помощью микроскопа с фазово-контрастной приставкой после разведения крови и гемолиза эритроцитов раствором оксалата аммония.

С целью повысить точность микроскопического метода число тромбоцитов подсчитывают в двух камерах, затем вычисляют среднюю арифметическую.

Реактивы и оборудование

• 1% раствор оксалата аммония.
• Смеситель Сали.
• Камера Горяева (2 шт.).
• Световой микроскоп с увеличением х 40 или микроскоп с фазово-контрастной приставкой (например, КФ-4 или др.).

Образцы крови для исследования

Определение числа тромбоцитов возможно в крови, стабилизированной цитратом натрия или нанесенным на стенки пластиковой пробирки мелкодисперсным порошком этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА). При использовании микроскопического метода предпочтительнее брать кровь на цитрате натрия, чтобы исключить влияние ЭДТА на результаты подсчета тромбоцитов.

Техника выполнения

В сухую пластиковую пробирку вносят 1,98 мл 1% оксалата аммония и 0,02 мл крови. Медленно и аккуратно перемешивают смесь в течение 2 мин, а затем ее инкубируют в течение 20 мин при комнатной температуре. Далее заполняют две камеры Горяева содержимым пробирки и на 10 мин помещают их в чашку Петри, в которой находится влажная марля или смоченный фильтр. После этой инкубации, которая необходима для оседания тромбоцитов, подсчитывают их число в 25 квадратах. Среднюю арифметическую результатов подсчета в двух камерах умножают на 1000. При исследовании цитратной крови результат увеличивают на 10 % и умножают на 1000, что позволяет корректировать разведение венозной крови раствором натрия цитрата.

У здорового человека число тромбоцитов в периферической крови колеблется в довольно широком диапазоне - от 150 до 400 х 109/л.

Недопустимо исследование числа тромбоцитов в охлажденных образцах крови. При гемолизе возможно занижение числа тромбоцитов. В ряде случаев при исследовании числа тромбоцитов на гематологических анализаторах встречается так называемая псевдотромбоцитопения, обусловленная агрегацией и группировкой тромбоцитов в присутствии ЭДТА. Эту проблему решает забор крови на цитрате натрия.

Для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов на гематологических анализаторах существуют контрольные образцы с разным содержанием этих клеток. О возможности использования этих образцов для обеспечения контроля качества при подсчете числа тромбоцитов микроскопическим методом не существует общепринятых рекомендаций. Для повышения точности результатов микроскопического исследования следует периодически контролировать воспроизводимость результатов определения числа тромбоцитов разными лаборантами в течение рабочего дня и на основе полученных данных повышать точность и снижать вариацию при выполнении этой методики Коэффициент вариации микроскопического метода у опытных лаборантов не превышает 10 %.

Интерпретация результатов исследования

В клинической картине тяжелого течения идиопатической тромбоцитопенической пурпуры доминирует геморрагический синдром. При вторичных тромбоцитопениях геморрагический синдром, как правило, умеренный, и сочетается с клиническими симптомами основного заболевания, обусловившими тромбоцитопению. В тех случаях, когда число тромбоцитов менее 100 х 109/л длительно наблюдается без каких-либо проявлений фонового заболевания, следует думать об идиопатической тромбоцитопенической пурпуре.

Тромбоцитозы также наблюдаются при миелопролиферативных заболеваниях. Нередко на фоне миелопролиферации отмечают нарушения реологических свойств крови за счет полиглобулии. В последнем случае, а также при числе тромбоцитов более 700 х 109/л у пациентов повышается риск тромбозов. Однако на фоне миелопролиферативных заболеваний, сопровождающихся тромбоцитозом более 1500 х 109/л, парадоксально наблюдается геморрагический синдром.

При тромбоцитопении и наличии геморрагического анамнеза с раннего детского возраста весьма важно оценить размер тромбоцитов, в т. ч. MPV (средний объем) в мазке крови, а также наличие каких-либо включений в тромбоциты.

Причины ошибок

• Использование одной камеры, меньшее число подсчитываемых квадратов.
• Неточность градуировки разных смесителей.
• Ошибки преаналитического этапа исследования, в т. ч. неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Недостаточная квалификация лаборанта.

Другие аналитические технологии

Практически все гематологические анализаторы неплохо измеряют число эритроцитов и лейкоцитов в крови, хорошие результаты точности и воспроизводимости демонстрирует метод определения концентрации гемоглобина, реализованный в таких приборах. Однако и в настоящее время еще встречаются образцы анализаторов, которые число тромбоцитов при тромбоцитопениях подсчитывают неточно, и, как правило, наблюдается завышение числа тромбоцитов при их автоматизированном подсчете. Особенно ярко этот недостаток проявляется при работе с образцами крови, в которых число тромбоцитов ниже 50 х 109/л. Этот недостаток есть следствие того, что тромбоциты гораздо мельче других клеток крови, поэтому сложнее выполнить их корректный подсчет в той же камере и такими же техническими приемами, что и другие клетки крови. Следует отметить также, что на показатели точности подсчета тромбоцитов на гематологическом анализаторе весьма существенное влияние оказывают качество и надежность используемых калибраторов. Именно поэтому в сложных диагностических ситуациях или при глубокой тромбоцитопении в анамнезе для уточнения числа тромбоцитов следует применять микроскопический метод.

Подсчет клеток крови в окрашенных мазках имеет низкую точность и воспроизводимость, поэтому он не может быть рекомендован для применения в современных клиниках.

www.sweli.ru

Определение количества тромбоцитов в крови

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ТРОМБОЦИТОВ В КРОВИ

Микроскопический метод подсчета

Чаще всего используется метод подсчета тромбоцитов в счетной камере Горяева микроскопией при фазовом контрасте, т.е. с фазово-контрастной приставкой. Мало точен и не может быть рекомендован метод подсчета тромбоцитов в мазке крови.

В настоящее время все шире используются определение количества тромбоцитов и их распределение по величине (гистограмма) с помощью автоматических счетчиков крови. Эти аппараты точны и позволяют проводить экспресс-диагностику (определения выполняются за 1 мин).

Принцип. Производится подсчет тромбоцитов в камере Горяева с применением в качестве разводящей и гемолизирующей жидкости раствора оксалата аммония. При подсчете используют фазово-контрастную микроскопию.

Реактивы. 1% раствор оксалата аммония.

Ход определения. Исследование можно проводить как в крови, полученной из пальца, так и в стабилизированной цитратом венозной крови. В последнем случае полученный при подсчете результат умножают на коэффициент 1,1 (учитывают разведение венозной крови раствором цитрата натрия - 9:1).

Разведение крови. Самым удобным и достаточно точным является способ разведения крови в пробирках (не в меланжере). Для этого, в предварительно высушенную чистую силиконированную или пластиковую (полистирол) пробирку пипеткой отмеривают 1,98 мл 1% оксалата аммония и осторожно вносят в нее 0,02 мл крови. В течение 1-2 мин содержимое пробирки тщательно перемешивают без вспенивания. Заполняют две камеры Горяева и на 10-15 мин помещают их для оседания тромбоцитов во влажную камеру (чашку Петри со смоченной фильтровальной бумагой или марлей). В каждой камере подсчитывают тромбоциты в 25 больших квадратах.

Фазово-контрастная микроскопия проводится при помощи обычного микроскопа, осветителя типа ОИ-19 (или аналогичного) и устройства для наблюдения методом фазового контраста КФ-1 или КФ-4.

Подготовка микроскопа. После установки на микроскопе фазовых объективов и фазового конденсора производят фокусировку объективов 40х на сетке камеры Горяева. Устанавливают освещение и центрируют изображение фазовой пластинки и кольцевой диафрагмы. Микроскопию проводят с зеленым светофильтром. При работе с фазово-контрастной установкой необходимо пользоваться камерами одного типа, так как фокусировка оптических систем зависит от толщины стекла камеры.

Расчет определения числа тромбоцитов в 1 мкл крови. Среднюю арифметическую величину из двух параллельных определений умножают на 1000 (площадь 25 больших квадратов - 1 мм2, высота камеры - 0,1 мм, разведение 1:100; следовательно, количество тромбоцитов должно быть умножено на1 х10х100 = 1000).

Нормальные пределы колебаний числа тромбоцитов в крови у человека составляют от 170 до 350 х 109/л. Ошибка метода ± 6,5%.

Подсчет тромбоцитов в крови и определение их размера в мазке - важная часть диагностики тромбоцитопений, эссенциальной и полицитемической тромбоцитемии, ДВС-синдрома, тромботической тромбоцитопенической пурпуры и других микротромбоваскулитов, нарушений гемостаза при аутоимунных формах патологии (СКВ, антифосфолипидном синдроме и др.) и при гепатолиенальном синдроме. При наследственных тромбоцитопатиях наблюдаются формы с микроцитозом (синдром Вискотта-Олдрича) и преобладанием гигантских форм кровяных пластинок (аномалии Бернара-Сулье и Мей-Хегглина), а также формы без изменения размеров этих клеточных элементов.

Подсчет тромбоцитов на гематологическом анализаторе.

На сегодняшний день методом выбора при исследовании тромбоцитов является их определение на автоматическом анализаторе. Автоматические счетчики позволяют получать достаточно надежные результаты при определении количества тромбоцитов.

При подсчете тромбоцитов по Фонио коэффициент вариации находится в пределах 20%, в камере Горяева - составляет 7-10%, тогда как автоматический подсчет воспроизводится с точностью до 2-4%.

Современные анализаторы сигнализируют о выходе количества тромбоцитов за референтные пределы, наличии агрегатов тромбоцитов, макротромбоцитов или других элементов, сравнимых по объему с тромбоцитами (микроэритроциты), что существенно облегчает трактовку получаемых результатов.

В то же время следует иметь в виду, что в отличие от ручного подсчета тромбоцитов, где проводится предварительный лизис эритроцитов, автоматические счетчики крови анализируют тромбоциты и эритроциты в одной камере без предварительной обработки. Тромбоциты распознаются по размерам в диапазоне 2-20 фл. Это создает проблему дифференцирования больших форм тромбоцитов (макротромбоцитов) и сравнимых с ними по объему эритроцитов (микроцитов), их фрагментов (шизоцитов), а также отшнуровавшихся фрагментов цитоплазмы лейкоцитов (клеточный дебрис).

Ложное занижение числа тромбоцитов может быть при их агрегации, агглютинации под действием тромбоцитарных агглютининов и при прилипании тромбоцитов к лейкоцитам (тромбоцитарный «сателлитизм»). При подсчете на гематологических анализаторах в качестве антикоагулянта используется ЭДТА. При наличии аутоантител к тромбоцитам калиевая соль ЭДТА инициирует агрегацию тромбоцитов, что проявляется псевдотромбоцитопенией.

Нормальные величины. Количество тромбоцитов у здоровых людей составляет 170 - 350 х 109/л.

Клиническое значение

Снижение количества PLT в крови - тромбоцитопения - может развиваться в результате снижения продукции PLT:

наследственные: синдром Франкони (Фанкони), врожденная тромбоцитопения, краснуха новорожденных;

приобретенные: лейкозы, миелодиспластические синдромы, миелофиброз, метастазы новообразований в костный мозг; дефицит витамина В12 и фолиевои кислоты (мегалобластные анемии), ночная пароксизмальная гемоглобинурия, вирусные инфекции, интоксикации, наследственные аномалии, ионизирующее облучение, прием миелодепрессивных препаратов, циклическая тромбоцитопения, почечная недостаточность. в результате повышения деструкции PUT: инфекции (значительное, иногда катастрофическое снижение PLT, наблюдается при Конго-Крымской геморрагической лихорадке), эклампсия беременных, гемолитико-уремический синдром (ГУС), ВИЧ-инфекция, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, системная красная волчанка, хронический лимфолейкоз, хронический активный гепатит, посттрансфузионная тромбоцитопения; гемодиализ, кровотечения, разрушение в селезенке (гиперспленизм при болезнях накопления, лимфомах, волосатоклеточном лейкозе, миелопролиферативных заболеваниях, портальной гипертензии);

в результате потребления PLT: синдром ДВС.

Клинико-диагностическое значение тромбоцитопений (по С.А. Луговской и соавт., 2002)

Патогенетические механизмы	Клинические ситуациии патологические состояния
Недостаточность гемопоэза -нарушение образования тромбоцитов	Гипо-и апластические состояния, лейкозы, метастазы рака в костный мозг, ионизирующее облучение, химиотерапия, дефицит витамина В12 или фолиевои кислоты, вирусные инфекции, сепсис, милиарный туберкулез и др.
Повышенное потребление тромбоцитов	Кровопотеря, ДВС, гигантская гемангиома, тромбоз, геморрагическая тромбоцитемия.
Повышенная деструкция тромбоцитов (внутриклеточный, внутрисосудистый гемолиз)	Ауто- и иммунные гемолитические анемии, изоиммунные, гетероиммунные (гаптеновые), лекарственные, вирусные, системная красная волчанка, лимфопролиферативные заболевания, поеттрансфузионные реакции и др.
Механические повреждения тромбоцитов	Протезирование клапанов сердца, экстракорпоральное кровообращение.
Интоксикация: экзогенная, эндогенная	Химические вещества, лекарственные препараты, алкоголь, уремия, тяжелые заболевания печени.
Повышенная секвестрация в селезенке (гиперспленизм)	Спленомегалия при циррозе печени, портальной гипертензии, гистиоцитозах, болезнях накопления, болезни Гоше, синдроме Фелти, туберкулезе селезенки, миелопролиферативных заболеваниях, талассемии.

Иммунные тромбоцитопении

(по С.А. Луговской и соавт., 2002)

Заболевание	Характеристика антитромбоцитарных антител
Идиопатическая (аутоиммунная) тромбоцитарная пурпура	Аутоантитела против неизмененных антигенов тромбоцитов больного
Гаптеновая (гетероимунная) тромбоцитопения	Гаптеновые аутоантитела против измененных или чужеродных антигенов на поверхности тромбоцитов
Лекарственная тромбоцитопения	Антитела против комплекса лекарства (хинин, гепарин) с тромбоцитарным антигеном
Тромбоцитопения, ассоциированная с вирусной инфекцией	Антитела против вирусных антигенов, фиксированных на поверхности тромбоцитов, или против измененных тромбоцитарных антигенов
Аллоиммунная тромбоцитопения	Аллоантитела против аллоантигенов тромбоцитов плода или переливаемых тромбоцитов
Неонатальная аллоиммунная тромбоцитопеническая пурпура	Аллоантитела матери, проникшие в организм плода. Направлены против аллоантигенов тромбоцитов плода и отца, отсутствующих на тромбоцитах матери

Повышение количества PLT в крови - тромбоцитоз - характерно для миелопролиферативных заболеваний. Тромбоцитоз наблюдается также при злокачественных новообразованиях, после операций, при воспалительных заболеваниях (острый ревматизм, ревматоидный артрит, туберкулез, остеомиелит), после спленэктомии, циррозе печени, кровотечениях, в период выздоровления при мегалобластных анемиях, лечении кортикостероидами, остром гемолизе, физических перенапряжениях.

Тромбоцитозы

Средний объем тромбоцита (МРV)

У здоровых людей MPV равен 6-12 фл и находится в обратной зависимости от числа тромбоцитов. MPV увеличивается с возрастом. У мужчин MPV несколько выше, чем у женщин.

Использование ЭДТА в качестве антикоагулянта вызывает изменение формы тромбоцитов от диска к сфере, что приводит к увеличению MPV на 10-12% в течение 2 часов, а затем показатель существенно не меняется. Под действием цитрата натрия MPV может уменьшаться или увеличиваться, а при высокой концентрации (1:4) - не изменяется со временем. Кроме типа применяемого антикоагулянта и времени от момента взятия пробы до исследования, на MPV оказывает влияние температура окружающей среды. Преходящее увеличение MPV отмечается у рабочих, контактирующих с асфальтовыми испарениями, органическими растворителями. MPV - важный диагностический показатель функции тромбоцитов.

PDW - показатель, являющийся мерой гетерогенности размеров (анизоцитоза) тромбоцитов. Величина PDW в среднем составляет 10-15%.

Как артефакт, ложно завышенное увеличение PDW может быть связано с присутствием микроцитов, шизоцитов, микроагрегатов тромбоцитов, фрагментов цитоплазмы лейкоцитов.

Этот показатель находится в обратной зависимости от числа тромбоцитов и их периода жизни. В каждом конкретном случае важна не только величина PDW, но и ее динамика во времени, а также связь с другими тромбоцитарными показателями. Так, увеличение PDW с одновременным снижением MPV свидетельствует о преобладании микротромбоцитов среди общей популяции тромбоцитов (указывает на угнетение тромбоцитопоэза), а сочетание повышенного PDW с увеличением MPV отражает нарастание числа макротромбоцитов (усиление продукции тромбоцитов). Одновременное присутствие фракций макротромбоцитов и микротромбоцитов ведет к увеличению PDW, но MPV может оставаться в пределах нормы. В современных гематологических анализаторах отдельными показателями указывается процентное содержание микротромбоцитов (MicroPLT) и макротромбоцитов (MacroPLT).

PDW может применяться для дифференциальной диагностики. Так, увеличение PDW свыше 15% было обнаружено у 50% больных эссенциальной тромбоцитемией, у 21% пациентов с реактивным тромбоцитозом и лишь у 14% здоровых людей.

РСТ - показатель, характеризующий процент тромбоцитарной массы в объеме крови: вычисляется суммированием прямо измеренных объемов тромбоцитов или произведением среднего объема тромбоцитов на их число.

У здорового человека показатель стремится остаться стабильным: при уменьшении числа тромбоцитов усиливается тромбопоэз, в циркулирующую кровь выбрасывается большее число молодых макротромбоцитов, что ведет к увеличению MPV. При увеличении количества циркулирующих тромбоцитов снижается продукция их в костном мозге, тем самым уменьшается процент макротромбоцитов и MPV уменьшается. Однако при нарушении этого равновесия происходит или уменьшение РСТ, что, в конечном счете, приводит к патологии первичного гемостаза и риску возникновения кровотечений, или повышение РСТ, увеличивающее активность тромбоцитов и их способность к агрегации. Это повышает риск тромбозов.

Нормальные значения РСТ варьируют в пределах 0,15-0,35%. Было обнаружено, что снижение РСТ менее 0,1% обусловило возникновение послеоперационных кровотечений у пациентов с развившейся тромбоцитопенией. Также было отмечено, что этот показатель оказался более чувствительным для оценки риска возникновения кровотечения, чем число тромбоцитов.

Если скрининговые методы указывают на нарушение функции тромбоцитов, необходимо выполнить специальные тесты с учетом диеты и лекарственных препаратов, принимаемых пациентом (отмена за 7-10 суток перед исследованием глюкокортикостероидов, аспирина и других нестероидных противовоспалительных средств, адреноблокаторов, блокаторов кальциевых каналов, антиагрегантов: пентоксифиллина, папаверина, теофиллина, дипиридамола, тиклопидина, антибиотиков - пенициллина, карбенициллина).

Методы определения длительности кровотечения

Длительность кровотечения является скрининговым тестом для выявления нарушений первичного гемостаза. Метод основан на определении времени кровотечения из нанесенной на поверхности кожных покровов небольшой ранки стандартного размера. Это время зависит от способности сосудисто-тромбоцитарных гемостатических механизмов останавливать кровотечение из поврежденных мелких сосудов и капиллляров и поэтому его продолжительность может характеризовать состояние первичного гемостаза. Оно может быть нарушено вследствие дефектов сосудистого звена, неполноценности функциональных свойств кровяных пластинок или дефицита/дефекта плазменных кофакторов тромбоцитарных реакций (фибриногена, фактора Виллебранда), выраженной тромбоцитопении. При снижении числа тромбоцитов менее 100x109/л имеется прямая связь между степенью тромбоцитопении и удлинением времени кровотечения. Длительность кровотечения коррелирует также с геморрагическими тенденциями при тромбоцитопатиях и болезни Виллебранда. Увеличение времени кровотечения наблюдается и при тяжелой анемии (Ht

Помимо решения диагностических задач тест рекомендуется проводить для контроля за эффективностью применяемой гемостатической терапии, для своевременного выявления угрозы геморрагических осложнений при проведении дезагрегационной терапии. Длительность кровотечения должна быть определена у больного в период предоперационной подготовки, т.к. значительная часть больных с патологией тромбоцитарного звена гемостаза имеет скрытую форму заболевания, которая тем не менее дает тяжелые кровотечения в ходе операции и после нее.

В настоящее время используют в основном два принципа при определении длительности кровотечения; проведение теста в условиях, не затрудняющих течение первичного гемостаза, и в условиях, препятствующих его осуществлению.

К первым методам относится тест Duke, при выполнении которого колотую ранку глубиной 3,5 мм наносят скарификатором в нижней части мочки уха; выступающие капли крови осторожно, не прикасаясь к раневой поверхности, снимают фильтровальной бумагой через 15-30 с. Регистрируют время от момента нанесения укола до прекращения кровотечения, которое в норме не превышает 4 мин. Тест малочувствителен и не позволяет выявить нарушения при тромбоцитопатиях легкой и средней тяжести.

Наиболее распространенными за рубежом методами определения длительности кровотечения второй группы являются различные модификации метода Ivy, который предложил проводить исследование на верхней конечности в условиях веностаза, затрудняющего сосудистые реакции.

Определение длительности кровотечения по методу Айви

Принцип метода

Оценивают длительность кровотечения после разреза кожи предплечья скарификатором с глубиной разреза 3 мм. Стандартизация метода достигается равной глубиной кожного разреза и созданием венозного стаза путем повышения венозного давления до 40 мм рт. ст. при помощи сфигмома-нометра, что предупреждает эффект преждевременного склеивания краев раны.

Реактивы и оборудование

70% раствор этанола.

Сфигмоманометр.

Скарификатор, способный осуществить разрез кожи глубиной 2-3 мм.

Ход выполнения

Сфигмоманометр накладывают на плечо, нагнетают в нем давление, равное 40 мм рт. ст., и поддерживают такое давление в течение всего исследования.

Ладонную поверхность предплечья обрабатывают раствором этанола.

Натягивают кожу предплечья в поперечном (по отношению к костям предплечья) направлении.

Скарификатором наносят три разреза кожи по 5-10 мм (направление разреза должно быть перпендикулярно натяжению кожи предплечья, т. е. параллельно костям предплечья) глубиной 3 мм и включают секундомер.

Капли крови осторожно удаляют фильтровальной бумагой путем ее смачивания через каждые 15-30 с.

Регистрируют время остановки кровотечения из каждой ранки.

Снижают давление в манжете сфигмоманометра.

Вычисляют средний результат длительности кровотечения для каждого из трех разрезов.

Оценка результатов исследования

Существует несколько схожих методов для оценки длительности кровотечения , однако метод Айви отличается от аналогичных неплохой воспроизводимостью и малой травматичностью. В оригинальном исполнении нормальное время кровотечения не превышает 8 мин, однако указанный норматив условен, поскольку результаты определения длительности кровотечения этим методом значимо варьируют в зависимости от варианта скарификатора и опыта исследователя, поэтому необходимо уточнить нормативы для каждой лаборатории. При тромбоцитопениях, тромбоцитопатиях и болезни Виллебранда длительность кровотечения часто удлинена, а при изолированных дефектах коагуляцион-ного гемостаза (гемофилии и др.) длительность кровотечения не отличается от нормы.

Причины ошибок

Нестандартный скарификатор, неглубокий (менее 3 мм) разрез кожи, недостаточная квалификация лаборанта.

Исследование агрегационной функции тромбоцитов

Принцип метода

Тромбоциты способны агрегировать под воздействием различных субстанций, называемых индукторами (стимуляторами) агрегации (АДФ, адреналин, арахидоновая кислота, тромбин, кальциевый ионофор А23187, коллаген, фибрин-мономер, бычий коагуляционный фактор VIII, ристоцетин и др.). Изучение агрегационной функции тромбоцитов осуществляют при помощи специального прибора - агрегометра. В основе записи агре-гатограммы этим прибором - принцип Борна, который предполагает графическую регистрацию выраженности уменьшения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы в процессе агрегации тромбоцитов. В случае нарушения агрегационной функции тромбоцитов происходит незначительное изменение оптической плотности, что и регистрирует этот прибор.

Забор крови и подготовка плазмы для исследования

После пункции локтевой вены самотеком кровью наполняют пластиковую или силиконированную пробирку, в которую предварительно добавлен раствор цитрата натрия (соотношение объемов крови и цитрата натрия равно 9:1). Затем пробирку тщательно и аккуратно (без встряхивания) перемешивают в течение 2-3 минут.

Материалом для исследования является бедная тромбоцитами плазма.

БТП получают в два этапа. На первом этапе получают богатую тромбоцитами плазму, для чего цитратную кровь центрифугируют в течение 7 минут при 240 g. На втором этапе богатую тромбоцитами плазму переносят в другую пробирку и повторно центрифугируют в течение 15 минут при 1200-1400 g.

Реактивы и оборудование

0,11 М раствор цитрата натрия (Na3C6H607).

Агрегометр с компьютером и принтером.

Стимуляторы агрегации (АДФ, адреналин, коллаген и др.). В табл. 12 представлены оптимальные конечные концентрации наиболее распространенных стимуляторов агрегации тромбоцитов.

Таблица. Оптимальные конечные концентрации стимуляторов агрегации тромбоцитов

Для проведения анализа предварительно необходимо подсчитать число тромбоцитов на гематологическом анализаторе или микроскопическим методом.

Ход определения

Материалом для исследования является богатая тромбоцитами плазма, но для калибровки прибора необходима еще и бедная тромбоцитами плазма.

Поскольку при разном числе тромбоцитов необходимы разные концентрации индукторов агрегации, следует приготовить богатую плазму с одинаковым числом тромбоцитов для всех образцов (исследуемых и контрольных). Для стандартизации числа тромбоцитов следует развести богатую тромбоцитами плазму бедной таким образом, чтобы число тромбоцитов стало равным 150-300 х 109. Например, число тромбоцитов 600 х 109, поэтому исследуемую богатую тромбоцитами плазму необходимо развести бедной тромбоцитами плазмой этого же больного в 2 раза. Таким образом, на первом этапе исследования очень важно определить число тромбоцитов.

Для записи агрегатограммы любому агрегометру необходимо определить оптическую плотность и ряд других параметров в исследуемых образцах, поэтому компьютерный алгоритм агрегометра будет требовать установить в измерительные гнезда пробирки с бедной и богатой тромбоцитами плазмами.

В кювету агрегометра вносят 0,3 мл богатой тромбоцитами плазмы (со стандартным числом тромбоцитов 150-300 х 109), инкубируют пробирку в гнезде для измерения в течение 60-120 с для нагрева богатой тромбоцитами плазмы до 37 °С, затем включают магнитную мешалку, добавляют 0,015 мл раствора индуктора агрегации. В момент добавления индуктора агрегации включают запись регистрации агрегации*.

Оценка результатов исследования

Существует много способов оценки агрегатограмм, но наиболее информативно измерение степени агрегации и угла наклона, поскольку неплохую воспроизводимость демонстрируют именно эти показатели. Их нормальный диапазон зависит от большого числа причин (марки агрегометра, используемых реагентов, числа тромбоцитов, конечной концентрации индуктора, скорости вращения магнитной мешалки и многих других), поэтому общепринятых диапазонов нормы при измерении агрегационной функции тромбоцитов нет. Это вынуждает врачей-лаборантов уточнять нормативы самостоятельно.

Применение низких концентраций стимуляторов агрегации дает возможность оценить раздельно первую и вторую волны агрегации. Большую ценность имеет информация о наличии или отсутствии второй волны агрегации, поскольку именно вторая волна на агрегатограмме отражает реакцию высвобождения содержимого тромбоцитарных гранул (плотных и а-гранул). Весьма полезно при записи агрегации тромбоцитов использовать несколько стимуляторов агрегации. При наличии геморрагического синдрома и отсутствии нарушений агрегации тромбоцитов необходимо повторно выполнить исследование через 1-1,5 месяца. И наоборот, при наличии специфичных изменений агрегации для болезни Бернара-Сулье, тромбастении Гланцманна и другой патологии необходимо повторно исследовать агрегационную функцию тромбоцитов.

Причины ошибок

Тест очень чувствителен к дефектам преаналитического этапа. Даже минимальный недостаток цитрата натрия вследствие низкого гематокрита ведет к значительным погрешностям и невоспроизводимым результатам.

Последовательность манипуляций и объемы смешиваемых реагентов могут отличаться для разных типов агрегометров.

Для исследования агрегации необходимо использовать специальные иглы для пункции кубитальной вены, которые способны наполнить кровью пробирки с цитратом натрия самотеком. Забирать кровь шприцом нельзя.

Некачественная обработка магнитных мешалок и пробирок ведет к грубым ошибкам. Существенную помощь в обработке лабораторной посуды оказывают ультразвуковые мойки.

Неточный замер прибором оптической плотности богатой и бедной тромбоцитами плазмы также приводит к ошибкам. Подобный дефект возможен при наличии царапин на пробирках.

Неточное определение числа тромбоцитов и, как следствие, исследование образца плазмы с нестандартным числом тромбоцитов является причиной ошибок.

Варианты результатов записи агрегации тромбоцитов методом Борна при различных вариантах нарушений сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.

Патология гемостаза		Арахи-доновая кислота	Коллаген	Адреналин	Ристоцетин
Тромбоцитопатия	Норма или снижение*	Норма или снижение*	Норма или снижение*	Норма или снижение*
Влияние аспирина или других нестероидных противовоспалительных препаратов		Отсутствие или значимое снижение	Норма для концентрации 5 ug/ml или снижение для концентрации 2 ug/ml	Снижение с нарушением формирования второй волны на агрегато-	Норма или умеренное снижение
Нарушение пула хранения	Норма или снижение (часто умеренное) с нарушением второй волны			Снижение с нарушением формирования второй волны на агрегато-грамме
Синдром Бернара-Сулье					Отсутствие или значимое снижение
Нарушение реакций высвобождения (секреции) из тромбоцитарных гранул	Норма или снижение (часто уме­ренное) с нарушением второй волны			Снижение с нарушением формирования второй волны на агрегато-
Тромбастения Гланцманна	Отсутствие	Отсутствие	Отсутствие	Отсутствие
Болезнь Виллебранда					Отсутствие или значимое снижение (иногда норма при 2N, повышение при типе 2В)

При тромбоцитопатиях может быть нарушена агрегация с одним (обуславливая так называемую парциальную тромбоцитопатию) или разными индукторами агрегации.

Иногда диагностические трудности возникают при дифференциальной диагностике болезни Виллебранда и болезни Бернара-Сулье, поскольку варианты нарушений при исследовании агрегационной функции тромбоцитов при этих состояниях одинаковы. В этом случае помогает добавление в исследуемую богатую тромбоцитами плазму нормальной БТП или крио-преципитата. Эта простая модификация восстанавливает ристомициновую агрегацию у больных с болезнью Виллебранда, но не исправляет нарушение агрегации при болезни Бернара-Сулье.

gigabaza.ru

Резистентность (ломкость) капилляров Проба Румпель-Лееде-Кончаловского

Из методов оценки ломкости капилляров чаще всего используется манжеточная проба Румпель-Лееде-Кончаловского (рис. 712051024).

Манжету для измерения АД накладывают на плечо, создавая в ней постоянное давление, равное 100 мм рт. ст. Через 5 минут оценивают результаты пробы. При отсутствии нарушений сосудисто-тромбоцитарного гемостаза ниже манжеты появляется лишь небольшое количество петехиальных (мелкоточечных) кровоизлияний (менее 10 петехий в зоне, ограниченной окружностью диаметром 5 см). При повышении проницаемости сосудов или тромбоцитопении число петехий в этой зоне превышает 10 (положительная проба).

Метод Дьюка

Предварительно мочку уха согревают между пальцами.

Стерильным скарификатором или плоским ланцетом прокалывают нижний валик мочки уха (глубина прокола 3,5-4,0 мм) и включают секундомер.

Выступающие капли крови каждые 30 с промокают фильтровальной бумагой, не прикасаясь к ранке. Как только наступит момент, когда новые капли крови не образуются, выключают секундомер и определяют общую длительность кровотечения, а также оценивают размеры капель (рис. 712051042).

Рис. 712051042. Определение времени кровотечения по Дьюку (а) у здорового человека (время кровотечения 3,5 мин.) и (б) у больного с выраженной тромбоцитопенией (время кровотечения 20 мин.)

Запомните

В норме время кровотечения по Дьюку не превышает 4 мин. Его увеличение наблюдается при выраженных тромбоцитопениях или/и тяжелых нарушениях их функции (тромбоцитопатиях).

Следует помнить также, что у 60 % больных с этой патологией тест оказывается отрицательным, и время кровотечения нормально.

Метод Айви

Несколько более чувствительным является тест Айви, когда оценивают время кровотечения из надрезов на коже ладонной поверхности верхней трети предплечья на фоне искусственного повышения венозного давления с помощью манжеты для определения АД, в которой поддерживают давление 40 мм рт. ст. (рис. 1.87).

В норме время кровотечения по Айви не превышает 8 минут.

Подсчет числа тромбоцитов

Наибольшее распространение в настоящее время получили три метода подсчета тромбоцитов в крови:

Подсчет в камере Горяева;

Подсчет в мазках крови;

Электронно-автоматический метод.

Подсчет в камере Горяева

Метод подсчета тромбоцитов в камере Горяева является самым точным, но достаточно трудоемким.

Подсчет тромбоцитов в 1 л проводится по стандартной методике с учетом разведения крови и объема большого квадрата счетной сетки Горяева с применением фазово-контрастного микроскопа для лучшего контрастирования тромбоцитов.

Заполняют камеру Горяева и подсчитывают тромбоциты в 25 больших квадратах. Практически для расчета количества тромбоцитов в 1 л крови число сосчитанных в 25 больших квадратах кровяных пластинах умножают на 2х106.

Метод подсчета тромбоцитов в окрашенных мазках крови

Метод подсчета тромбоцитов в окрашенных мазках кровиоснован на подсчете числа тромбоцитов на 1000 эритроцитов с последующим пересчетом на 1 л крови.

Зная число эритроцитов в 1 л крови, рассчитывают количество тромбоцитов в этом объеме.

Тромбоциты по Фонио — анализ, позволяющий определить точное количество тромбоцитов в крови и узнать причины многих заболеваний. Эти кровяные клетки являются важным фактором сворачивания крови.

Рассмотрим, в чем состоит суть такого метода анализа крови и о чем говорят его показатели.

Суть метода Фонио, алгоритм анализа

Многие пациенты не знают, что это такое — подсчет тромбоцитов по указанному методу. Подсчет тромбоцитов по Фонио осуществляется на одну тысячу эритроцитов в мазках крови, окрашенных специальным красителем. Затем полученное количество пересчитывается в соотношении на 1 литр или 1 мкл.

Метод позволяет максимально точно узнать количество этих кровяных телец, что, в свою очередь, повышает точность диагноза.

Как делается анализ

Общее число этих клеток в определенном объеме крови называется коагулограммой. Кровь берется из пальца. Сдать ее для анализа надо каждому обследуемому человеку, ведь такой показатель способен помочь врачу определить многие опасные патологии.

При сдаче крови на тромбоциты необходимо учитывать следующее:

1. Их показатель оказывается максимальным после физических перегрузок и приема еды. Вот почему сдача материала должна проводиться не ранее чем через восемь часов после последнего приема пищи.
2. То же относится и к физической нагрузке: если анализ делается в состоянии возбуждения человека или обследуемый недавно занимался тяжелым физическим трудом, результаты могут быть неточными.
3. Анализ берется утром.
4. Чтобы точность анализа была максимальной, процедуру надо повторить еще два раза с перерывом в 3-5 суток.

Как считаются результаты

Чтобы провести подсчет по методу Фонио, необходим 14%-й раствор магния сульфата и 2,6%-й раствор натрия этилендиаминтетраацетата. Реактивы берутся с помощью капилляра Панченкова.

1. В пробирку вводится один из реактивов, в капилляре его должно быть до уровня «75». Туда же добавляется кровь, взятая тем же сосудом (ее должно быть до отметки «К».).
2. Компоненты надо тщательно перемешать и приготовить тонкие мазки.
3. Они окрашиваются по методу Романовского-Гимзе в течение двух-трех часов, если был взят сульфат магния, или на протяжении 35-45 минут, если был взят ЭДТА. В это время происходит окрашивание тромбоцитов. Они будут окрашены в фиолетово-розовый оттенок.

Как считаются тромбоциты? Для этого в поле зрения микроскопа производится подсчет эритроцитов и тромбоцитов до 1 тысячи красных кровяных телец. Количество тромбоцитов в крови можно узнать, умножив их число в мазке на количество эритроцитов в 1 мкл и разделив полученное произведение на 1000. Специфическая окраска клеток помогает врачу более точно подсчитать число анализируемых клеток.

Анализ крови по Фонио отличается высокой точностью, поэтому много специалистов пользуется именно данными, полученными данной методикой.

Особенность метода Фонио

Эта методика является самой распространенной на сегодняшний день. Главное отличие этого метода от других в том, что содержание форменных элементов учитывается в мазке (он является окрашенным).

Достоинства данного метода в следующем:

• лаборант может хорошо видеть все клетки в мазке;
• кровь обследуется в какое угодно время, без привязки к моменту получения образца крови;
• формула подсчета количества клеток достаточно проста, кроме того, это количество зависит от тысячи красных кровяных телец в микролитре.

О чем говорят низкие показатели

Если тромбоциты у человека понижены, это говорит о развивающейся тромбоцитопении. Она бывает:

• при воздействии радиационного излучения;
• при отравлении свинцом и другими веществами;
• при разных болезнях системы крови;
• если у человека развиваются коллагенозы;
• при развитии хронического нефрита.

У людей с низким количеством тромбоцитов часто бывают внутренние кровотечения, кровоподтеки и гематомы, что является следствием понижения эластичности сосудов. Также обращают на себя внимание петехии, то есть точечные кровотечения.

О чем говорят повышенные показатели тромбоцитов

Повышение количество тромбоцитов в крови (тромбофилия) наблюдается в таких случаях:

• употребление некоторых лекарств;
• если пациенту была сделана хирургическая операция;
• если у человека была удалена селезенка;
• после травм, если они сопровождались большой кровопотерей;
• при развитии у человека злокачественных новообразований;
• при железодефицитной анемии.

Если тромбоциты у человека повышены, это очень опасно для его здоровья и жизни . В таком случае существенно повышается риск развития тромбоза. При этом внутри сосуда образуется сгусток крови, препятствующий нормальному кровотоку.

Особенно опасным считается повышение количества этих клеток у беременных. Это может иметь крайне неприятные последствия:

• выраженный токсикоз беременных;
• прерывание беременности;
• выраженная задержка плода;
• варикоз беременных;
• тромбоз ног у беременных;
• рост кровяного сгустка внутри сосуда (тромбоэмболия);
• инфаркт.

При таких патологиях, как воспаление оболочек мозга, печени, легких, токсоплазмоз, также повышается количество тромбоцитов. Такому состоянию сопутствует и повышение уровня лейкоцитов.

Нормы у женщин, мужчин и детей

Норма тромбоцитов по методу Фонио — от 120 до 400 тысяч в одном кубическом миллиметре крови. Однако у тех или иных групп населения полученные при анализе показатели будут существенно отличаться. Такие отличия являются вариантами нормы.

Итак, норма у детей от одного года — от 180 до 320 тысяч в одном миллиметре кубическом. У новорожденных детей нормальные пределы показателей тромбоцитов немного шире — от 100 до 420 тысяч в одном кубическом миллиметре крови.

У мужчин число тромбоцитов колеблется от 180 до 400 тысяч. Максимальное их количество наблюдается в 40-летнем возрасте. Далее происходит некоторое снижение количества тромбоцитов, однако оно не опускается ниже 320 тысяч.

Норма у женщин — 180-340 тысяч указанных элементов крови. Максимальное же количество бывает в 16 лет. Во время менструаций нормальный показатель этих клеток падает до 150 тысяч. У подростков это число может снизиться даже до 75 тысяч.

Какие факторы влияют на количество тромбоцитов

К увеличению тромбоцитов причастны многие факторы. Так, все острые инфекции в организме неизбежно ведут к повышению количества этих форменных элементов крови. То же происходит и при нарушениях системы кроветворения, онкологических патологиях.

Если человек часто переживает стресс, это тоже влияет на количество тромбоцитов в крови. Некоторым может показаться странным то, что при кровопотерях число таких форменных элементов растет. Но так человеческий организм пытается компенсировать потери крови.

Повышенные тромбоциты бывают и у лиц, длительно употребляющих алкоголь.

Если же человек длительно и бесконтрольно принимает препараты, обладающие тромбоцитопеническими свойствами, то в итоге картина его крови существенно изменяется. Это же бывает и при поражении многих органов, в частности, щитовидной железы, печени и др. Иногда кровотечение из носа или порез может отрицательно сказаться на количестве тромбоцитов и снизить их количество.

Как нормализовать показатели тромбоцитов

Меры по нормализации количества этих форменных элементов будут существенно отличаться в зависимости от того, какие результаты получены в ходе анализа. Но все меры будут бесполезными, если на организм продолжают воздействовать вредные факторы. Их надо устранить в первую очередь . Надо стараться избегать эмоциональных и физических перегрузок.

Итак, повысить количество тромбоцитов можно такими способами:

1. Исключить из рациона соления, спиртное, морскую капусту, виноград (красный).
2. Включить в рацион такие продукты, как свежая рыба, печень, перец болгарский, яблоки, гречку.
3. Врач назначит необходимые лекарства для подъема количества тромбоцитов в крови. Самолечение ими категорически запрещается!
4. Не использовать те лекарства, которые в качестве своих побочных эффектов имеют тромбоцитопению.
5. Принимать витамины, такие как А, группы В, С.

Чтобы снизить количество этих форменных элементов крови, надо в первую очередь наладить образ жизни и уменьшить количество стрессов. Нельзя заниматься травмоопасными видами спорта.

Чтобы понизить количество этих клеток крови, нужно:

• употреблять препараты ацетилсалициловой кислоты в рекомендованных врачом дозах;
• отказаться от плодов шиповника, бананов, манго, граната, потому что такие продукты повышают число тромбоцитов;
• ввести в рацион побольше клюквы, черники, облепихи, свеклы и других продуктов;
• принимать поливитамины и препараты магния;
• соблюдать суточное количество воды и не допускать обезвоживания.

Как видим, метод подсчета тромбоцитов по Фонио отличается высокой точностью. И если анализ показал расхождения с нормой, можно быстро и эффективно скорректировать показатель этих форменных элементов крови и не допустить опасных последствий.

Если же не устранять нарушения, связанные с отклонениями количества таких клеток от нормы, возможно развитие очень серьезных патологий.

Тромбоцитами по Фонио называется исследование, которое позволяет выявить истинную концентрацию тромбоцитов в крови и определить первопричины многих патологий. Эти клетки крови оказывают большое влияние на способность крови свёртываться.

В данной статье мы расскажем о сути анализа тромбоцитов по методу Фонио и правильную интерпретацию его результатов.

Суть данного анализа

Далеко не каждый пациент знает, что представляет собой подсчёт количества тромбоцитов по Фонио. Он осуществляется на 1000 эритроцитов в материале, смешанном со специальным реактивом-красителем. После этого полученное число пересчитывается в отношении на 1 мкл или 1 литр крови.

Достоинством этого метода является достаточно точное определение количества этих кровяных клеток, что, естественно, ведет к более точной постановке диагноза.

Разберемся, как именно осуществляют подсчет тромбоцитов по Фонио.

Как проводят анализ?

Общее количество тромбоцитов в определенном представляет собой коагулограмму. Для проведения данного анализа забирают капиллярную кровь из пальца. Сдавать этот анализ необходимо каждому обследуемому пациенту, так как его результаты могут помочь лечащему врачу установить наличие или отсутствие многих опасных заболеваний.

Во время сдачи анализа на уровень тромбоцитов в крови следует учитывать следующее:

• Концентрация этих кровяных телец оказывается максимальной после приёма пищи и физических нагрузок. По этой причине сдавать материал необходимо по истечении не менее восьми часов после последней трапезы.
• Данное требование относится и к физическим нагрузкам: если пациент сдаст кровь в состоянии возбуждения или после тяжелых физических нагрузок, то результат может оказаться ложным.
• Кровь необходимо сдавать рано утром.
• Для достижения максимальной точности анализ необходимо провести еще дважды с промежутком в 3-5 дней.

Подсчет результатов

Для подсчета количества тромбоцитов по Фонио используют 2,6%-й раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА) и 14%-й раствор сульфата магния. Реактивы набирают с помощью пипетки к СОЭ-метру (или капилляра Панченкова).

1. Сначала в пробирку вводят один из реактивов, который в капилляре должен находиться на уровне деления 75. Туда же добавляют кровь, взятую пипеткой (до уровня деления К).
2. Компоненты тщательно перемешиваются, а затем подготавливаются тонкие мазки.
3. После этого мазки окрашивают по методике Романовского-Гимзе в течение 35-45 минут, если был использован ЭДТА, или на протяжении двух-трёх часов, если применялся магния сульфат. В течение этого временного промежутка тромбоциты окрашиваются в фиолетово-розовый цвет.

Как проводится подсчёт тромбоцитов по методу Фонио? Для этого в микроскопа проводят подсчет тромбоцитов и эритроцитов до 1000 красных кровяных клеток. Число тромбоцитов в плазме крове узнают, умножая их количество в мазке на число эритроцитов в 1 мкл, а затем полученное значение делят на 1000. Специфический цвет помогает врачу более точно подсчитать количество исследуемых клеток.

Исследование обладает высокой точностью, поэтому большое количество врачей используют результаты, полученные данным способом.

Норма тромбоцитов по Фонио интересует многих.

Особенности метода

Данная методика на сегодняшний день является самой популярной и распространенной. Основное отличие этой методики заключается в том, что форменные элементы подсчитываются в окрашенном мазке крови.

Данный метод обладает следующими достоинствами по сравнению с другими:

• лаборант может очень хорошо рассмотреть все клетки крови под микроскопом;
• кровь можно исследовать в любое удобное время, не привязываясь к моменту получения материала;
• клетки подсчитываются по достаточно простой формуле, помимо этого, число зависит от 1000 эритроцитов в микролитре крови.

Что выявляет анализ тромбоцитов по Фонио?

О чём свидетельствуют пониженные показатели?

Если уровень тромбоцитов у обследуемого пациента понижен, то это свидетельствует о наличии тромбоцитопении, которая развивается от:

• воздействия ионизирующего излучения (радиации);
• отравления свинцом и прочими веществами;
• различных заболеваний системы крови;
• от наличия у пациента коллагенозов;
• развивающегося нефрита хронической формы.

У людей с пониженным уровнем тромбоцитов достаточно часто возникают гематомы, кровоподтеки и внутренние кровотечения, что является признаком пониженной эластичности и сопротивляемости сосудов. Также часто можно наблюдать петехии - точечные красные или фиолетовые пятна на коже.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио может выявить повышение их числа.

О чем говорит повышенный уровень тромбоцитов?

Тромбофилия - высокий уровень тромбоцитов в крови, наблюдается в следующих состояниях:

• приём некоторых лекарственных препаратов;
• после проведения оперативного вмешательства;
• после удаления у пациента селезёнки;
• вследствие травм, сопровождавшихся большой потерей крови;
• при развитии у человека железодефицитной анемии;
• при наличии у пациента развивающихся злокачественных новообразований.

Очень опасна для жизни и здоровья пациента, поскольку в таком случае значительно возрастает риск возникновения тромбоза - образования внутри сосуда сгустка крови, препятствующего нормальному кровотоку.

Повышенное количество тромбоцитов может оказаться весьма опасным для беременных женщин. Такое явление может привести к следующим крайне неприятным последствиям:

• выраженная форма токсикоза у беременных;
• самопроизвольное прерывание беременности;
• варикоз во время беременности;
• развитие тромбоза ног при беременности;
• увеличение размеров кровяного сгустка, образовавшегося внутри сосуда;
• инфаркт.

Также при наличии воспаления легких, печени, оболочек мозга, токсоплазмоза, уровень тромбоцитов в крови может повыситься. В таком состоянии повышается и уровень лейкоцитов.

Нормальные показатели у детей и взрослых

Нормальный показатель тромбоцитов по Фонио колеблется в пределах от 120 до 400 тыс. в 1 куб. миллиметре крови. Но стоит не забывать, что для определенных групп населения полученные показатели будут значительно различаться. Такие различия считаются вариациями нормы.

Норма для детей старше 1 года составляет 180-320 тыс. в 1 куб. миллиметре крови. Для новорожденных детей предел показателя тромбоцитов несколько шире - от 100 до 420 тыс. в 1 куб. миллиметре.

Для мужчин нормальный показатель тромбоцитов колеблется в пределах от 180 до 400 тыс. Максимальная концентрация этих кровяных клеток наблюдается в возрасте 40 лет. В последующем количество тромбоцитов несколько понижается, но не опускается ниже 320 тыс.

Нормальный показатель рассматриваемых элементов крови для женщин колеблется в пределах 180-340 тыс. Максимальная концентрация наблюдается в возрасте 16 лет. При менструации норма снижается до 150 тыс. В подростковом возрасте это число может упасть даже до 75 тыс.

Анализ крови на тромбоциты по Фонио очень информативен.

Что влияет на концентрацию?

Многие факторы причастны к повышению уровня тромбоцитов. Так, все инфекционные заболевания организма в острой форме приводят к увеличению количества данных кровяных клеток в крови. То же самое наблюдается и при наличии нарушений кроветворной системы и онкологических заболеваний.

Также количество тромбоцитов в крови часто меняется у людей, переживающих постоянные стрессовые ситуации. Помимо этого, некоторым покажется странным, что во время больших кровопотерь количество этих кровных клеток возрастает, но это говорит о том, что организм человека таким образом компенсирует потери крови.

Повышенная концентрация тромбоцитов также наблюдается у людей, долгое время употребляющих спиртные напитки.

При длительном и бесконтрольном приёме препаратов, оказывающих тромоцитопеническое действие, картина крови значительно изменится. Такое же происходит и при заболевании некоторых органов, к примеру, печени, щитовидной железы и др. Иногда порезы или кровотечения из носа могут негативно повлиять на количество тромбоцитов в крови, понижая их количество.

Что нужно делать для нормализации показателя тромбоцитов?

Понятное дело, что меры по нормализации концентрации тромбоцитов будут несколько отличны для разных вариантов полученных результатов. Но все они окажутся бесполезными, если вредные факторы продолжают воздействовать на организм. В первую очередь необходимо избегать физических и эмоциональных перегрузок.

Итак, увеличить уровень тромбоцитов можно следующими способами:

1. Исключить из рациона питания спиртные напитки, морскую капусту, соления и красный виноград.
2. Включить в свой рацион свежую рыбу, болгарский перец, печень, гречку и яблоки.
3. Иногда лечащий врач может назначить специальные лекарственные препараты для подъёма уровня тромбоцитов. Категорически не стоит заниматься самолечением!
4. Не принимать лекарства, которые в качестве побочного эффекта могут вызвать тромбоцитопению.
5. Употреблять витамины группы А, В и С.

Для понижения количества тромбоцитов необходимо в первую очередь наладить здоровый образ жизни и исключить стрессовые ситуации. Категорически запрещается заниматься травмоопасными видами спорта. Понизить уровень тромбоцитов поможет:

• употребление препаратов ацетилсалициловой кислоты;
• отказ от бананов, граната, манго, плодов шиповника;
• включение в рацион свеклы, черники, клюквы, облепихи;
• употребление поливитаминов и препаратов магния.

Выводы

Таким образом, исследование обладает высокой точностью. И если в результате оно показало отклонения от нормы, то в срочном порядке необходимо скорректировать этот показатель, дабы избежать опасных последствий.

Теперь понятно, что значит тромбоциты по Фонио.

где Х - число лейкоцитов в 1 мкл крови, а - число лейкоцитов в 100 больших квадратах, 20 - разведение крови, 100- число подсчитанных квадратов, 250 -объем одного большого квадрата 1/250.

Таким образом, количество лейкоцитов, подсчитанных в 100 больших квадратах, умножают на 50.

При наличии в периферической крови ядросодержащих клеток красного ряд, они не лизируются и подсчитываются вместе с лейкоцитами. В этом случае, чтобы определить истинное количество лейкоцитов, из общего числа посчитанных клеток вычитают количество клеток красного ряда.

Например: Общее количество лейкоцитов при подсчете в камере (или на анализаторе) – 45*109/л. При подсчете лейкоцитарной формулы найдено, что на 100 лейкоцитов присутствует 50 эритробластов (нормобластов).

Рассчитываем истинное количество лейкоцитов в крови:

150 клеток (общее количество - 45*109/л (количество клеток в 1 мкл, лейкоцитов и нормобластов, полученное при подсчете в камере полученное при подсчете или на анализаторе)

лейкоцитарной формулы)

100 клеток (лейкоциты) - Х (истинный лейкоцитоз крови)

Таким образом, истинное число лейкоцитов в крови составляет 30 * 109/л.

Основные источники ошибок при подсчете лейкоцитов в камере:

Неправильное соотношение объемов крови и уксусной кислоты, взятые в пробирку.

Неправильно подготовленный раствор уксусной кислоты (при концентрации большей, чем 5%, часть лейкоцитов может лизироваться, что приведет к занижению результата).

Длительное нахождение пробы при температуре выше 28°С, что может ускорить лизис

лейкоцитов в образце и привести к занижению результата.

Неправильное заполнение камеры Горяева. Как и при подсчете эритроцитов, камеру необходимо оставлять на 1 минуту для оседания клеток.

Недостаточно хорошо отмытая после предыдущего определения камера Горяева. Оставшиеся в камере лейкоциты могут завышать результаты анализа. (Луговская и др., 2002)

2.3 Методы подсчета количества тромбоцитов.

Для определения количества тромбоцитов используют следующие методы: подсчет в счет ной камере, мазках крови и гематологическом анализаторе. Каждая группа методов имеет преимущества и недостатки.

Подсчет тромбоцитов в камере достаточно точен, не требует для расчета количества эритроцитов. С другой стороны этот метод более трудоемкий, поскольку тромбоциты в нативном виде представлены мелкими и плохо контрастированными элементами. Недостаток метода в необходимости подсчета тромбоцитов в ближайшие часы после взятия крови.

Определение количества тромбоцитов в мазках крови значительно уступает по своей точности камерному методу или автоматическим счетчикам. Ошибки при подсчете в мазках крови могут быть обусловлены плохим качеством мазка и связанным с этим неравномерным распределением тромбоцитов, неточным определением количества эритроцитов крови. Существенное неудобство метода - необходимость одновременного подсчета тромбоцитов и эритроцитов в крови. Преимущество его - возможность исследования тромбоцитов в любое время, независимо от момента взятия крови.

Метод определения тромбоцитов с помощью гематологического анализатора позволяет достаточно точно определить количество тромбоцитов, их средний объем и распределение по объему. (Луговская и др., 2002)

Метод подсчета в камере.

Принцип: Определение количества тромбоцитов в 1 л крови с учетом ее разведения и объема квадрата счетной сетки камеры Горяева с применением фазово-контрастного устройства для контрастирования тромбоцитов.

Реактивы: Применяют 1% раствор оксалата аммония, который быстро и полностью лизирует эритроциты. Раствор кипятят и фильтруют. Хранят в холодильнике.

Ход определения: Исследуемую кровь разводят в 200 раз; для этого в сухую пробирку набирают 4 мл реактива и 0,02 мл крови. Перемешивают и оставляют на 25-ЗО мин для гемолиза эритроцитов. Подготавливают счетную камеру. Перемешивают разведенную кровь и заполняют камеру: подносят каплю крови с помощью стеклянной палочки или пастеровской пипетки к краю покровного стекла, следя за тем, чтобы кровь равномерно без пузырьков воздуха заполняла всю поверхность сетки, не затекая в бороздки. Помещают счетную камеру во влажную камеру на 5 мин для оседания тромбоцитов (чашка Петри с уложенной по краям смоченной водой фильтровальной бумагой). Подготавливают фазово-контрастное устройство в соответствии с инструкцией, приложенной к нему. Тромбоциты считают в 25 больших квадратах.

Тромбоциты выглядят в счетной камере в виде мелких, хорошо преломляющих свет образований.

Расчет тромбоцитов проводят по формуле:

,

где Х - число тромбоцитов в 1 мкл крови; а - число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших квадратах, 200 - разведение крови, 25 - число сосчитанных квадратов, 250 - объем одного большого квадрата 1/250 мкл. Число подсчитанных тромбоцитов умножают на 2000.

Воспроизводимость. Ошибка метода составляет 6,5%. (Клиническая лабораторная аналитика, 1999)

Метод подсчета в мазках крови (по Фонио).

Принцип: Метод основан на подсчете числа тромбоцитов в окрашенных мазках крови на 1000 эритроцитов с расчетом на 1 мкл (или 1 л) крови, исходя из содержания в этом объеме количества эритроцитов.

Реактивы: Применяют 14% раствор сульфата магния или 6% раствор этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА).

Ход определения: Реактив набирают в капилляр Панченкова до метки “75 и вносят в пробирку, затем добавляют кровь, взятую тем же капилляром, до метки “0”. Содержимое пробирки перемешивают и готовят тонкие мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 2-3 ч (при использовании раствора сульфата магния) и в течение 30-45 мин (при приме нении ЭДТА). Высохшие мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, подсчитывая количество тромбоцитов в тонких местах препарата (эритроциты должны быть расположены разрозненно).

Подсчет проводят следующим образом: в каждом поле зрения микроскопа считают число эритроцитов и тромбоцитов, передвигая мазок до тех пор, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов.

Расчет: количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов составляет А‰ Зная число эритроцитов в 1 л крови, подсчитывают количество тромбоцитов в 1 л крови.

Например: А=60‰; число эритроцитов 5 *1012/л

Составляют пропорцию: 60 - 1000

Х - 5*1012/л, откуда

Нормальные величины тромбоцитов 180,0-320,0 * 109/л

В настоящее время существуют готовые наборы для подсчета тромбоцитов (фирма «Гем»). (Луговская и др., 2002)

Заключение.

Для подсчета и анализа клеток крови используют ручные микроскопические методы и гематологические счетчики разного уровня автоматизации. В настоящее время необходимо внедрение технологий автоматического изучения клеточного состава крови, для того чтобы добиться высокого качества и точности исследований, исключая ошибки, зависящие от работы лаборантов. Клинические лаборатории нуждаются в разработке новых более совершенных методов.

Общий анализ крови позволяет получить ценную диагностическую информацию. Часто в лабораториях используют автоматические гематологические счетчики, позволяющие оценить количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов и некоторых других форменных элементов крови. Несмотря на удобство проведения автоматического подсчета, наиболее информативными считаются методы микроскопического исследования. Один из них – тромбоциты по Фонио.

Что такое тромбоциты

Тромбоцитами называют безъядерные клетки крови, которые синтезируются тканями красного костного мозга. Цикл их жизнедеятельности составляет около 7 суток, после чего они утилизируются в печени и селезенке. У тромбоцитов процесс старения выражен более, чем у других форменных элементов крови.

Как и другие составляющие крови, тромбоциты делятся на молодые, зрелые и старые. У здорового человека количество зрелых клеток не должно превышать 95%. Если при анализе обнаруживается большая концентрация молодых телец, это свидетельствует о развитии некоторых заболеваний, среди которых можно назвать многочисленные повреждения кровеносных сосудов и прочее. Кроме молодых, в плазме крови нередко обнаруживаются старые тромбоциты. Такое явление говорит о нарушении процесса производства и утилизации клеток.

Роль в организме

Тромбоциты принимают активное участие в процессах, связанных с образованием тромбов. Они также производят специальное вещество, необходимое для регенерации тканей, стимуляции деления клеток, регулировки уровня проницаемости клеточных мембран и поддержания эластичности сосудов.

Ценное значение количественный и качественный состав тромбоцитов имеет при диагностике заболеваний сердца и сосудов. Высокое количество этих телец называется тромбоцитозом, пониженное – тромбоцитопенией.

Важно! В зависимости от возраста клетки имеют разную степень окрашивания, что дает возможность использовать этот морфологический признак для проведения дифференциальной диагностики.

В чем заключается метод Фонио

Подсчет тромбоцитов по Фонио – это анализ, помогающий выявить точное количество этих телец в крови, диагностировать многие заболевания у человека. При этом подсчет тромбоцитов осуществляется в мазке крови на тысячу эритроцитов, после чего это число пересчитывается в соотношении на 1 микролитр или литр. Методика считается очень точной, применяется для диагностики многих патологий.

Во время анализа кровь окрашивается по методу Романовского-Гимзе

Для проведения анализа кровь берется из пальца. Общее количество тромбоцитов в единице крови называется коагулограммой. Этот вид исследования назначают каждому пациенту, ведь анализ помогает заподозрить и выявить многие болезни.

Подготовка к анализу

На результат анализа тромбоцитов по Фонио могут повлиять некоторые факторы. В связи с этим необходимо правильно подготовиться к сдаче крови. Пациенту накануне перед забором биологического материала следует учесть следующие рекомендации:

• сдача крови должна проводиться через 8 часов после последнего приема пищи, так как многие продукты способны повлиять на цветовой показатель форменных элементов крови;
• накануне перед анализом нельзя заниматься спортом. Если человек выполнял любые физические нагрузки, результат исследования может быть неточным;
• забор материала осуществляется в утреннее время;
• наиболее точную информацию можно получить при сдаче крови повторно. Это помогает проследить за концентрацией тромбоцитов в динамике.

Кроме этого, врачу следует обязательно сообщить, принимались ли до этого какие-либо медикаментозные средства. Многие лекарства также способны исказить результат.

Подсчет тромбоцитов по Фонио

При подсчете тромбоцитов лаборант применяет несколько видов реактивов. Это этилендиаминтетраацетат натрия или сульфат магния. Реактивы берутся с помощью пипетки СЕЭ-метра.

Анализ проводится в несколько этапов:

1. В пробирку добавляют один из реактивов и кровь с помощью пипетки. Количество реактива берется до отметки 75, объем крови – до отметки К.
2. Полученную массу хорошо перемешивают и используют для изготовления мазков.
3. Если применяется магния сульфат, мазок окрашивается по методу Романовского-Гимзе на протяжении 120 минут и 45 минут, если лаборант берет этилендиаминтетраацетат натрия. При этом тромбоциты окрашиваются в фиолетово-розовый цвет.

Подсчет тромбоцитов проводят через микроскоп

С помощью микроскопа производится подсчет тромбоцитов и эритроцитов до тысячи красных телец крови. Чтобы узнать количество тромбоцитов, их умножают на число эритроцитов в 1 микролитре, после чего делят полученную цифру на тысячу. Получить наиболее достоверные результаты помогает специфический окрас исследуемых клеток. Именно поэтому многие специалисты при постановке диагноза используют метод подсчета тромбоцитов по Фонио.

Преимущества методики

Способ подсчета эритроцитов по Фонио успешно применяется многими врачами на протяжении многих лет. Техника имеет ряд преимуществ, среди которых выделяют:

• при рассмотрении крови под микроскопом лаборант четко видит исследуемый материал, цвет, форму, число клеток;
• при необходимости анализ можно проводить в любое время суток;
• метод прост в использовании, что связано с простой формулой, но в то же время очень информативен.

Важно! Несмотря на то что медицина не стоит на месте и на сегодняшний день существуют новые методики подсчета частиц крови, метод Фонио не уступает им в своей точности и информативности.

О чем могут свидетельствовать низкие показатели

Тромбоцитопения или пониженная концентрация эритроцитов в крови у человека свидетельствует о развитии различных нежелательных состояний. К наиболее частым причинам низких показателей относят:

• радиационное облучение больного;
• воздействие на организм свинца и прочих вредных веществ;
• патологии системы кроветворения;
• коллагенозы у пациента (совокупность заболеваний, касающихся соединительной ткани);
• наследственную предрасположенность;
• хронический нефрит.

У больных с тромбоцитопенией наблюдаются такие клинические проявления, как частые носовые кровотечения, кровоточивость десен, подкожные геморрагии. У женщин заболевание проявляется в виде обильных и длительных месячных.

Тромбоцитопения вызывает склонность к кровоточивости

Лечение такого состояния подразумевает устранение основной причины, повлекшей за собой нарушение. При этом используется терапия с помощью медикаментозных средств. В особо тяжелых случаях проводится удаление селезенки или трансплантация костного мозга.

Причины повышенных показателей

При повышении числа рассматриваемых клеток на единицу крови речь идет о тромбоцитозе. Как правило, это вторичная патология, возникающая на фоне следующих состояний:

• лечение с помощью некоторых медикаментов;
• перенесенное оперативное вмешательство;
• удаление селезенки;
• обильные кровопотери;
• воспаление оболочки головного мозга;
• патологии почек и печени;
• развитие онкологических образований;
• железодефицитная анемия.

Наибольшая опасность тромбоцитоза заключается в образовании кровяных сгустков, способных закупоривать артерии. Это нередко ведет к инфарктам, инсультам и другим опасным заболеваниям.

Норма клеток у различных групп населения

При проведении анализа по методу Фонио используется норма от 120 до 400 тыс. клеток в кубическом миллиметре исследуемого материала. Колебание границ зависит от возраста пациента и его половой принадлежности. У женщин, мужчин и детей отклонения в пределах этих границ считаются нормой.

Нормальные показатели:

• дети до года – от 100 до 420 тыс. на мм 3 ;
• дети от года – от 180 до 320 тыс. на мм 3 ;
• мужчины – от 180 до 400 тыс. на мм 3 ;
• женщины от 180 до 340 тыс. на мм 3 .

У подростков уровень тромбоцитов может снижаться до 70 тыс. на мм3. У мужчин максимальное количество этих телец отмечается в возрасте 40 лет. Такие отклонения обязательно учитываются при постановке диагноза, объясняются физиологическими и возрастными особенностями организма.

Что влияет на уровень тромбоцитов в крови

Уменьшение или рост рассматриваемых клеток не всегда свидетельствует о развитии какой-либо патологии. Иногда уровень этих телец колеблется вследствие интенсивных и регулярных физических нагрузок, при неправильном питании. Многим людям может показаться странным тот факт, что при потере крови уровень тромбоцитов возрастает. Это объясняется попыткой организма компенсировать потерю крови повышенной выработкой ее форменных элементов.

Стрессы и вредные привычки могут повлиять на уровень тромбоцитов в крови

Часто показатели повышены у людей, употребляющих алкоголь на протяжении длительного времени. Нарушается норма тромбоцитов во время приема медикаментов с тромбоцитопеническим действием. Повлиять на результаты анализа может даже безобидное кровотечение из носа.

Методы нормализации показателей

Первое, что нужно сделать при обнаружении повышенных или пониженных показателей тромбоцитов в крови, это провести дальнейшее обследование пациента с целью выявления патологии, повлекшей за собой такое состояние. Главный метод терапии тромбоцитопении и тромбоцитоза – борьба с первопричиной. Если же нарушение развивается по безобидным причинам, повысить количество тромбоцитов можно с помощью таких способов:

• отказаться от вредных продуктов, исключить из рациона алкогольные напитки, красный виноград, зеленый чай, чернику, томаты;
• включить в ежедневный рацион яблоки, гречневую кашу, рыбные блюда, болгарский перец, печень;
• по назначению специалиста принимаются специальные медикаментозные средства;
• повысить количество клеток помогут витамины группы А, В и С.

Понизить концентрацию рассматриваемых элементов крови поможет отказ от экстремальных видов спорта, адекватная оценка стрессовых ситуаций, избегание конфликтов дома и на работе.

Для снижения тромбоцитов специалисты рекомендуют выполнять следующие правила:

• принимать ацетилсалициловую кислоту в соответствии с назначением лечащего врача;
• исключить из питания шиповник, гранат, манго и другие блюда, которые повышают уровень тромбоцитов;
• пить препараты магния курсами несколько раз в год;
• употреблять не менее полутора литров воды в сутки.

Подсчет тромбоцитов по методу Фонио – это один из наиболее точных методов исследования крови. С помощью такого анализа врач может выяснить многие патологии, подобрать соответствующее лечение для пациента. Проводится этот анализ также с профилактической целью, что необходимо для ранней диагностики заболеваний и недопущения развития серьезных последствий на их фоне.