Взятие материала и исследование на бледную трепонему. Все о бледной трепонеме Материал для исследования на бледную трепонему

Лекция N 19. Спирохеты (трепонемы, боррелии, лептоспиры).

Спирохеты - тонкие, спирально завитые бактерии длиной от нескольких до нескольких сотен микрометров, подвижные, грамотрицательные, хемоорганотрофы. Выделяют три основных типа движений - быстрое вращение вокруг продольной оси, сгибательные, штопорообразные (винтообразные). Медицинское значение имеют представители родов Treponema, Borrelia, Leptospira и Spirillum.

Род Treponema .

Род представлен туго закрученными спиралевидными бактериями длиной 5 - 20 мкм. Наиболее известный патогенный для человека вид - T. pallidum (бледная трепонема), подвид T. pallidum pallidum - возбудитель сифилиса.

Патогенные трепонемы дифференцируют по патогенности для различных видов лабораторных животных, способности ферментировать маннит, утилизовать лактат и образовывать специфические метаболиты.

“Lues Venerae” - “любовная чума” - одно из названий сифилиса (люес).

Морфология.

Возбудитель сифилиса имеет спиралевидную форму с одинаковыми по высоте завитками (более 10). Характер подвижности - плавные винтообразные и сгибательные движения (Treponema -с лат. - сгибающаяся нить). По Романовскому - Гимзе окрашиваются в бледно - розовый цвет (pallidum - с лат.- бледная). Легко выявить при помощи темнопольной микроскопии и после инпрегнации серебром.

Бледная трепонема чрезвычайно прихотлива к условиям культивирования и не способна длительно расти на питательных средах. Отличается очень медленным темпом размножения. В лабораторных условиях можно культивировать на кроликах, заражая их интратестикулярно (орхит с накоплением трепонем). Биохимические свойства изучены слабо в связи с проблемами культивирования и для характеристики T.pallidum практически не используются.

Антигенные характеристики.

Трепонемы имеют перекрестно - реагирующие антигены с другими спирохетами (боррелиями, лептоспирами). В связи с наличием в составе клеточных стенок бледных трепонем фосфолипидов (кардиолипин и др.), аналогичных клеткам млекопитающих, в ответ на эти антигены в организме вырабатываются специфичные не только для возбудителя сифилиса, но и перекрестно- реагирующие на кардиолипин и другие фосфолипиды тканей человека и животных так называемые вассермановские антитела. Они выявляются в РСК с кардиолипиновым антигеном (из сердец животных). Специфические антитела к возбудителю сифилиса выявляют в РНИФ и иммуноблоте.

Антиген Вассермана - фосфолипид, входящий в состав митохондриальных мембран (кардиолипин). Его получают из бычьего миокарда - ткани, богатой митохондриями. Благодаря антигенной общности с тканевыми фосфолипидами, антитела к кардиолипину трепонем реагируют с тканевым (митохондриальным) кардиолипином. Истинные аутоантитела против тканевого кардиолипина образуются при “антимитохондриальном (антифосфолипидном) синдроме”, обусловливая положительные реакции Вассермана (ложноположительные - применительно к возбудителю сифилиса) при коллагенозах (системная красная волчанка, ревматоидный артрит), проказе и других тяжелых инфекциях, связанных с повреждением тканей, при гемолитической анемии, при наркоманиях.

Патогенетические особенности.

Развитие сифилиса определяется двумя основными механизмами - склонностью к генерализации (высокая инвазивность) и периодической активизацией длительно персистирующего в организме возбудителя (“выход из засады”).

Из-за неустойчивости возбудителя во внешней среде заражение происходит при прямых контактах (в подавляющем большинстве случаев половым путем). Проникая через слизистые оболочки и незначительные повреждения кожи, возбудитель быстро проникает в ткани, распространяется лимфогенно и далее - гематогенно (генерализация).

Первые признаки болезни (первичный сифилис) возникает после инкубационного периода (в среднем 3 - 4 недели). В месте внедрения (первичной инвазии) происходит размножение возбудителя и возникает твердый шанкр - плотный безболезненный красноватый узелок, превращающияся в язву. Одновременно в результате проникновения трепонем в лимфатические узлы развивается регионарный лимфаденит и в дальнейшем - полиаденит. Генерализация инфекции происходит еще до появления шанкра и лимфаденита, т.е. сифилис с самого начала - системное заболевание.

После затихания клиники первичного сифилиса через некоторое время (от нескольких недель до нескольких месяцев) происходит рецидив инфекции, связанный с полиорганной репликацией трепонем (вторичный сифилис). Наблюдаются поражения кожи и слизистых (вторичные сифилиды, в которых находится большое количество трепонем), поражения внутренних органов, лимфоузлов, костей, суставов и мн.др. С учетом многообразия поражений вторичный сифилис называют “великим мистификатором”.

После вторичного сифилиса у части больных вновь формируется латентный сифилис (возбудитель уходит в подполье на годы), который у половины носителей может переходить в третичный сифилис . Он характеризуется формированием очагов гранулематозного воспаления - гумм , содержащих мало трепонем (практически не заразных). Распад гумм приводит к разрушению костных и мягких тканей и поражению жизненно важных органов. В отличие от первичного и вторичного сифилиса, третичный сифилис - хронический процесс, который никогда не завершается самоизлечением.

Мало известно о факторах патогенности T.pallidum и механизмах, позволяющих ему длительно ускользать от иммунологического надзора. Обнадеживает,что этот возбудитель сохраняет высокую чувствительность к антибиотикам. Современный сифилис по- прежнему хорошо поддается лечению, если процесс не достигает необратимых органических поражений.

Лабораторная диагностика.

При первичном и вторичном сифилисе возбудитель можно обнаружить в очагах поражений микроскопией. Более оптимальны для выявления бледных трепонем темнопольная и иммунолюминесцентная микроскопия . При первом методе необходимо исключить возможные артефакты (нити фибрина, например), наличие сапрофитических трепонем. T . refringens колонизирует наружные половые органы, отличается высокой подвижностью и отсутствием сгибательных движений. T . denticola колонизирует ротовую полость, ее завитки короче и направлены под более острым углом. В ротовой полости человека встречается также T . vincentii , которая в ассоциации с другими микроорганизмами может вызывать язвенно - некротическую ангину .

Кроме возбудителя сифилиса имеются очень близкие в генетическом и антигенном отношении трепонемы других подвидов T.pallidum, вызывающие поражения человека в странах с жарким климатом (фрамбезию, бержель, пинту ).

При окраске по Романовскому - Гимзе T.pallidum окрашивается в розовй цвет, непатогенные трепонемы - в синий или фиолетовый, T.refringens прокрашивается фуксином в красный цвет. Люминесцентная диагностика широко применяется для выявления трепонем в различных клинических материалах. Среди методов выявления возбудителя наибольшей чувствительностью и достаточной специфичностью обладает ПЦР.

Основные методы диагностики - серологические , т.е. выявление сывороточных антител. Применяют РСК с кардиолипиновым и трепонемным антигеном, флоккуляционные пробы (микроагглютинационный тест на кардиолипиновые антитела), РНГА. Более специфичными и чувствительными тестами являются тесты, основанные на непрямой иммунофлюоресценции (РИФ), реакция иммобилизации бледной трепонемы, ИФА на основе рекомбинантных белков трепонем.

В серодигностике сифилиса необходимо учитывать серонегативность первичного сифилиса в первые недели заболевания. Необходимо сочетание методов, основанных на выявлении антител как против кардиолипиновых, так и трепонемных антигенов. Кардиолипиновые тесты быстро становятся серонегативными после элиминации возбудителя (спустя несколько месяцев), антитрепонемные антитела сохраняются намного дольше. Существенное значение для определения активности процесса имеет определение антитрепонемных IgM - антител (при выявлении врожденного сифилиса -особо, поскольку IgM - антитела не переходят через плаценту от матери к плоду; при исследовании спинномозговой жидкости - для диагностики нейросифилиса и др.).

Лечение.

Чаще применяют депонированные пенициллины с пролонгированным действием, при непереносимости - макролиды, тетрациклины, цефалоспорины.

Специфической профилактики не существует.

Морфология и классификация.

Спиральные, имеющие до 10 неправильной формы крупных завитков, грамотрицательные бактерии с вращательно- поступательным характером движений. Анаэробы, часто требующие сложных сред для культивирования.

Патогенные для человека боррелии являются возбудителями возвратных тифов (рекуррентных лихорадок) или боррелиозов. B . recurrens передается человеку вшами, вызывает эпидемический или вшивый возвратный тиф. Остальные боррелиозы человека делят на две самостоятельные группы - аргасовые клещевые боррелиозы (АКБ), вызываемые более 12 видами боррелий, и иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ), вызываемые B.burgdorferi sensu stricto, B.garinii, B.afzelii и некоторыми другими.

АКБ связаны с аргасовыми клещами рода Ornithodorus, обитающими в тропических и субтропических регионах Африки, Азии, Америки, и характеризуются повторяющимися приступами лихорадки (как при малярии). ИКБ вызывают клещи рода Ixodes (группа I.ricinus / I.persulcatus), распространены преимущественно в лесной зоне в Евразии и Америке.

Культуральные свойства.

Представители этого рода взыскательны к условиям культивирования, особенно боррелии группы ИКБ. Для них необходимы факультативно - анаэробные условия, температура плюс 33 градуса Цельсия, специальные среды (BSK-2), содержащие среду 199, глюкозу, альбумин, цистеин, кроличью сыворотку, желатин и другие компоненты.

Антигенные свойства.

Имеют перекрестно- реагирующие антигены с другими спирохетами, родо - и видоспецифические антигены. Выделяют H- (жгутиковые) флагеллиновые антигены (обладают слабой специфичностью) и поверностные белковые антигены (OspA, OspC, более специфичны, используют для межвидовой и внутривидовой идентификации).

Патогенез поражений.

После присасывания клеща боррелии со слюной попадают в макроорганизм, размножаются во входных воротах инфекции, поражая кожу (эритема) и ближайшие лимфоузлы (фаза первичной адаптации ). Преодолев кожный и лимфатический барьеры, боррелии попадают в кровь, вызывают спирохетемию, проявляющуюся общетоксическим синдромом (стадия первичной диссеминации ). По мере прогрессирования процесса боррелии проникают через гематотканевые барьеры (в т.ч.- через гематоэнцефалитический барьер) и вызывают поражение различных органов и систем . В ряде случаев инфекция приобретает хронический характер, вызывая поражения нервной и сердечно - сосудистой систем, опорно - двигательного аппарата, вторичные поражения кожи и др. Существует недостаточно обоснованное на современном этапе мнение о связи преимущественных клинических проявлений с геновидовой принадлежностью боррелий (B.garinii - преимущественно неврологические проявления, например).

Эпидемиология.

ИКБ - облигатно- трансмиссивные природноочаговые инфекции, распространенные преимущественно в умеренном климатическом поясе северного полушария, лесной ландшафтной зоне и связанные с присасыванием клещей рода Ixodes. Очаги ИКБ часто сопряжены с очагами клещевого энцефалита, поскольку имеют одних и тех же переносчиков в Евразии - клещей I.reticulatus (таежный клещ) и I.ricinus (европейский лесной клещ).

Лабораторная диагностика.

Боррелии можно выделить с использованием среды BSK2 у больных из очагов кожных поражений, из крови и спинномозговой жидкости (при менингиальных формах), при исследовании переносчиков (в т.ч. снятых с людей) и теплокровных хозяев (наибольшая высеваемость - из мочевого пузыря) в природных очагах.

Боррелии можно выявить в иксодовых клещах с помощью световой микроскопии (окраска по Романовскому - Гимзе), темнопольной и люминесцентной микроскопии, ПЦР.

Основной метод серологической диагностики - реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) с корпускулярным антигеном B.afzelii, позволяющим выявлять антитела к боррелиям группы ИКБ.

Лечение.

Применяют предупредительную терапию (при положительных результатах исследования присосавшегося клеща) и лечение больных ИКБ тетрациклинами, пенициллинами и цефалоспоринами. Мер специфической профилактики не разработано.

Род Leptospira

Морфология.

Культуральные и биохимические свойства.

Хемоорганотрофы, аэробы. Лептоспиры - типичные гидрофилы, долго сохраняются во влажных субстратах, воде, влажной почве. Оптимум температуры от плюс 28 до 30 градусов Цельсия, рН 7,2 - 7,4. Культивируют преимущественно на жидких средах с добавлением сыворотки крови кролика (среда Терских).

Антигенные свойства.

Патогенные лептоспиры на основании антигенных свойств разделяют на серогруппы и серовары.

Эколого - эпидемиологические особенности.

Основными резервуарами инфекции являются дикие животные , преимущественно грызуны и насекомоядные (природные очаги, часто связанные с околоводными стациями), а также сельскохозяйственные и домашние животные (свиньи, крупный рогатый скот, собаки). У животных лептоспиры длительно сохраняются в почках и длительно выделяются во внешнюю среду с мочой. Человек заражается в природных очагах (чаще во время сельскохозяйственных работ) и в хозяйственных очагах (чаще купальные вспышки или профессионально обусловленные случаи лептоспирозов). Существенную роль в заражении имеют серые крысы и собаки. Существуют связи лептоспир определенных сероваров с отдельными видами животных (например, L.canicola - собаки).

Патогенез поражений.

В организм лептоспиры попадают через слизистые или повреждения (микротравмы) кожи. Патогенные лептоспиры благодаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры, проникают в кровь (лептоспиремия) и попадают в различные органы, преимущественно в почки и печень. Особое значение имеют поражения эндотелия капилляров с различными по выраженности геморрагиями вплоть до геморрагического синдрома, поражения печени с развитием желтухи, связанные с повреждениями гепатоцитов и гемолизом эритроцитов, поражения почек, прежде всего эпителия почечных канальцев, коркового и подкоркового вещества с развитием почечной недостаточности (анурия, уремия), менингиальные проявления.

Лабораторная диагностика.

Основным методом микроскопической диагностики является темнопольная микроскопия.

Выделение возбудителя проводят посевами на среде Терских, биопробой на золотистых хомячках. Исследуют мочу, кровь, спинномозговую жидкость, корковый слой почки.

Основным методом серологической диагностики является реация агглютинации- лизиса (РАЛ) с набором культур лептоспир основных серогрупп. Метод специфический, однако трудоемкий, поскольку необходимо поддерживать диагностический набор лептоспир, агглютинировать исследуемые сыворотки с лептоспирами всех основных серогрупп с последующей темнопольной микроскопией. При положительном результате наблюдается склеивание лептоспир в виде паучков или клубков с последующим лизисом. В настоящее время для серодиагностики применяют также ИФА.

Лечение.

Применяют антибиотики (пенициллины, тетрациклины).

Бледная трепонема - это бактерия рода Treponema, вызывающая инфекционное заболевание сифилис. Длина ее составляет от 8 до 20 мкм, ширина - от 0,25 до 0,35 мкм. Имеет форму спирали и напоминает штопор с количеством завитков 8–12 штук. Такой тип строения называют спирохетой, поэтому эта бактерия известна также как бледная спирохета.

Длинное тонкое тело позволяет микробу легко проникать в организм человека сквозь слизистые оболочки. В основном заражение происходит через половые органы.

Что представляет собой трепонема

Бледная трепонема была открыта в 1905 г. немецкими учеными Гофманом и Шаудином. При исследовании Treponema pallidum (лат. название, используется также написание T. pallidum) не обнаруживается методом окрашивания Грама, поэтому за бактерией закрепилось определение «бледная» (лат. pallidum). Имеет 4 подвида, каждый из которых несет угрозу здоровью человека:

Трепонема паллидум имеет тело, покрытое слизистой бесструктурной капсулой, трехслойную клеточную стенку, органеллы (вакуоли, рибосомы, мезосомы), цитоплазму. Концы у нее обычно заостренные, на них имеются выросты-блефаропласты, на которых располагается около 10 фибрилл (нитевидных структур) в виде пучков. Благодаря сокращениям клетки и имеющимся фибриллам бледная спирохета быстро передвигается. На пути к своей цели она совершает разнообразные движения: сгибательные, поступательные, вращательные, винтообразные и т. д.

При неблагоприятных условиях меняются формы бледной трепонемы, она приобретает вид цист и L-форму:

1. В L-форме трепонемы становятся шаровидными, останавливается их размножение и истончается клеточная стенка, однако рост и синтез ДНК продолжается.
2. Цисты покрыты защитной оболочкой и могут долго находиться в организме человека в латентном состоянии. Когда условия меняются на благоприятные, цисты становятся зернами, а затем приобретают привычную форму.

Трепонема паллидум чувствительна к ультрафиолету, боится щелочи, уксуса, спирта. Проявляет устойчивость к низким температурам (выдерживает замораживание до 1 года), но при нагревании свыше 50 °C гибнет в течение 15–20 минут. Вне организма человека может прожить не более 3 суток. Является строгим анаэробом, т. е. для энергетического обмена ей не требуется свободный кислород. Сопротивляемость цист и L-формы в несколько раз сильнее.

Признаки сифилиса

Попав в организм человека через слизистую, бактерия продолжает перемещение по лимфатическим и кровеносным сосудам, затем оседает в тканях. Первые признаки заражения обычно появляются через 20–30 дней после проникновения микроба в организм, но иногда это происходит не раньше чем через 3–4 месяца. Выделяют несколько стадий заболевания: первичный сифилис, вторичный и т. д. Каждая из них имеет характерные симптомы.

Первичный сифилис - стадия, возникающая сразу после заражения, симптомы становятся заметны спустя 10–90 дней. Больной может испытывать слабость, головную боль, боль в костях и мышцах, повышение температуры. Иногда ухудшения самочувствия не наблюдается. Часто увеличиваются лимфоузлы. На месте проникновения белой спирохеты образуется сифилома или - небольшой плотный узел диаметром до 1 см, постепенно трансформирующийся в язву.

Шанкр бывает единичный или в количестве нескольких штук и возникает не только на слизистых оболочках, но и на кожных покровах рук, бедер, живота и т. д. Шанкры имеют разновидности, называемые аномальными, их наличие часто сбивает с толку при постановке диагноза:

Вторичная стадия начинается спустя 3 месяца после того, как возбудитель сифилиса проник в организм. Ее длительность может достигать 5 лет. Периодически возникают высыпания на коже (кожные сифилиды), которые проходят сами через несколько недель. Они могут иметь разный вид: белые пятна на шее (« «), гнойники, бледно-розовые пятна на боках и т. д. Зуд и температура отсутствуют. Порой наблюдается локальное облысение. Сифилиды могут поражать слизистую горла в виде ангины и фарингита.

Третичный сифилис наступает спустя несколько лет​​ после заражения. Происходит разрушение внутренних органов, появляются характерные сифилиды на кожных и слизистых покровах. Слизистую и внутренние органы поражают гуммы - опухоли, приводящие к необратимому распаду тканей. На коже появляются бугорковые и гуммозные сифилиды (см. фото).

Выявление и лечение заболевания

Для диагностирования сифилиса проводится комплексное обследование. Сначала пациента осматривает дерматовенеролог на наличие высыпаний на коже и слизистых. Затем проводятся лабораторные исследования материала, взятого из язв и образований у больного. Могут проводиться такие исследования;

1. Трепонемные серологичекие тесты: РИТБ, РИФ, TPHA, ИФА, иммуноблотинг. Они позволяют выявить антитела к трепономе паллидум.
2. Нетрепонемные серологические тесты: реакция Вассермана, количественный тест
   VDRL, тест быстрых плазменных реагинов. Определяют наличие антител к фосфолипидам тканей.
3. Обнаружение трепонемы в очагах поражения: ПЦР, РИФ-Тр, темнопольная микроскопия.

Важно тщательно изучить все признаки, чтобы понять, что это такое, ведь симптомы сифилиса совпадают с симптомами многих других заболеваний. Если диагноз подтвердился, назначается лечение, тип которого зависит от стадии заболевания.

Терапия базируется на приеме антибиотиков. Основой препаратов обычно являются пенициллин, тетрациклин или эритромицин. Если же у пациента третичная стадия, то применяются средства на висмуте, отличающиеся сильной токсичностью. Также может практиковаться внутримышечное введение антибактериальных препаратов, пиротерапия.

Дезинфекция предметов домашнего обихода является обязательной и помогает убить возбудитель за пределами организма зараженного. Кроме того, необходимо провести диагностику и лечение полового партнера.

Содержание статьи

Бледная трепонема

Морфология и физиология

T.pallidum имеет форму спирали, протоплшматический цилиндр, который скручен в 8-12 завитков. От концов клетки отходят 3 периплазматических жгутика. Бледная трепонема плохо воспринимает анилиновые красители, поэтому ее окрашивают краской Романовского-Гимза. Однако наиболее эффективным методом является ее изучение в темнопольном или фазовоконтрастном микроскопе. Микроаэрофил. На искусственных питательных средах не растет. Т. pallidum культивируют в ткани яичка кролика, где она хорошо размножается и полностью сохраняет свои свойства, вызывая у животного орхит. Антигены. Антигенная структура Т. pallidum сложная. Она связана с белками наружной мембраны, липопротеидами. Последние являются перекрестно реагирующими антигенами, общими для человека и крупного рогатого скота. Они используются в качестве антигена в реакции Вассермана для серодиагностики сифилиса.

Патогенность и патогенез

К факторам вирулентности бледной трепонемы относят белки наружной мембраны и ЛПС, проявляющие свои токсические свойства после освобождения из клетки. Вместе с тем, по-видимому, способность трепонемы при делении образовывать отдельные фрагменты, проникающие вглубь тканей, также можно отнести к факторам вирулентности. В патогенезе сифилиса различают три стадии. При первичном сифилисе наблюдается образование первичного очага - твердого шанкра в месте входных ворот инфекции, с последующим проникновением в регионарные лимфоузлы, где возбудитель размножается и накапливается. Первичный сифилис продолжается около 6 недель. Вторая стадия характеризуется генерализацией инфекции, сопровождающейся проникновением и циркуляцией возбудителя в крови, что сопровождается кожными высыпаниями. Продолжительность вторичного сифилиса у нелеченых больных колеблется в пределах 1-2 лет. В третьей стадии обнаруживаются инфекционные гранулемы (гуммы, склонные к распаду), локализующихся во внутренних органах и тканях. Данный период у нелеченых больных продолжается несколько лет и заканчивается поражением ЦНС (прогрессивный паралич) либо спинного мозга (спинная сухотка).

Иммунитет

При сифилисе имеет место гуморальный и клеточный иммунный ответ. Образующиеся антитела не обладают протективными свойствами. Клеточный иммунный ответ связан с фиксацией возбудителя и образованием гранулем. Однако элиминации трепонем из организма при этом не происходит. Вместе с тем неблагоприятные условия среды индуцируют образование трепонемами цист, которые локализуются в стенке кровеносных сосудов. Полагают, что это свидетельствует о переходе заболевания в стадию ремиссии. Наряду с цистами трепонемы образуют L-формы. При сифилисе формируется ГЗТ, которая может быть выявлена кожно-аллергической пробой с убитой взвесью трепонем. Полагают, что проявление третичного периода сифилиса связано с ГЗТ.

Экология и эпидемиология

Сифилис - типично антропонозная инфекция. Болеют только люди, которые являются резервуаром инфекции в природе. Передача инфекции происходит половым путем и значительно реже - через белье и другие предметы. Во внешней среде (воздух) трепонемы быстро погибают.

Сифилис и другие трепонематозы

Сифилис - хроническая инфекционная венерическая болезнь человека, имеет циклический прогрессирующее течение, поражает кожу, слизистые оболочки, внутренние органы и нервную систему. Возбудителем заболевания является Treponema pallidum.Различают три основные периоды развития сифилиса, методы лабораторной диагностики которых имеют свои особенности. В ранний период болезни материалом для лабораторной диагностики служит выделение из твердого шанкра, пунктат с лимфатических узлов, соскобы с розеол, сифилид подобное. При вторичном и третичном периодах исследуют сыворотку крови и ликвор.В связи с тем, что выделение чистых культур трепонем в обычных бактериологических лабораториях невозможно, во время первичного периода болезни (редко позже) проводят бактериоскопический метод диагностики. Начиная с вторичного периода, используют, в основном, серологические методы.

Бактериоскопическое исследования

Перед взятием патологического материала сначала сифилитическую язву протирают ватным тампоном, для удаления сального налета и контаминуючои микрофлоры. Затем дно твердого шанкра раздражают скальпелем или металлической лопаточкой или энергично сжимают язву с боков пальцами в резиновой перчатке к выделению раневого экссудата. При небольшомколичества прозрачной жидкости ее можно внести в каплю 0,85% раствора хлорида натрия. При невозможности взять материал со дна шанкра (фимоз, рубцевание язвы и др.) проводят пункцию регионарных лимфатических узлов.Каплю жидкости из язвы или пунктата наносят на тонкое предметное стекло (1,1-1,2 мм), накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле зрения (краще!), или с помощью фазово-контрастного или аноптрального микроскопа.Бледная трепонема в темном поле зрения имеет вид слегка блестящей тонкой нежной спирали с крутыми равномерными округлыми первичными завитками. Движения плавные, тем она изгибается под углом. Но особенно характерные для нее Маятникообразные колебания. Возбудитель сифилиса необходимо отличать от Treponema refringens (что колонизирует наружные половые органы), которая толще, грубее, с неравномерными крупными завитками и имеет активные беспорядочные движения, но не сгибается. Трепонемы фузосп-ирохетозного симбиоза отличаются тонким рисунком, пологими завитками и беспорядочным движением.При диагностике ротового сифилиса бледную трепонему следует дифференцировать и от зубных трепонем, особенно Т. dentium, а также от Т. buccalis. Первую из них вообще трудно отличить от сифилитического. Она, правда, короче, имеет 4-8 острых завитков, маятникообразное движение отсутствует. Т. buccalis толще, имеет грубые первоначальные завитки и беспорядочное движение.При любых сомнениях нужно учитывать, что все сапрофитные трепонемы, в отличие от бледной, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями. Они не проникают в лимфатические узлы, поэтому исследования пунктатов имеет большую диагностическую ценность. Выявление в пунктате лимфатических узлов типовых трепонем беспрекословно подтверждает диагноз сифилиса.Итак, темнопольная исследования надавленные капли является наилучшим методом выявления возбудителя сифилиса. Его преимущества заключаются в том, что материал исследуют быстро, а морфология трепонем в живом состоянии наиболее характерна. Тушови мазки по методу Бурри теперь не используют.В случае невозможности провести исследование в темном поле зрения можно использовать различные методы окрашивания. Бледная трепонема плохо воспринимает анилиновые красители. Из многих предложенных способов окраски лучшие результаты получают при использовании окраски по Романовеьким-Гимзе. Изготовленные мазки фиксируют метиловым спиртом или в смеси Никифорова. Четкость результаты получают, когда краску Романовского-Гимзы наливают в препарат. Для этого в чашку Петри помещают обломки спичек, на них помещают предметное стекло мазком вниз и наливают краситель до тех пор, пока он смочите мазок. Время окраски при этом удваивают. При микроскопии бледные трепонемы имеют нежно-розовый цвет, а другие виды трепонем окрашиваются в синий или сине-фиолетовый цвет.Можно использовать и метод серебрения Морозовым. Трепонемы полностью сохраняют свои морфологические особенности и выглядят под микроскопом коричневыми или почти черными. Но посеребренные препараты долго не хранятся. В последнее время методы окрашивания трепонем применяют редко.Если начато лечение сифилиса химиопрепаратами, выявить возбудитель в патологических материалах даже с помощью темного поля зрения практически не удается. При получении отрицательного анализа его необходимо повторить.

Серологическая диагностика сифилиса

При проведении серологических реакций теперь используют следующие унифицированные в Украине методы исследований: реакции связывания комплемента (РСК), иммунофлуоресценции (РИФ), иммобилизации трепонем (PIT), микрореакцию преципитации (МПР) и иммуноферментный анализ (ИФА).На протяжении многих лет основной и наиболее распространенной реакцией считалась реакция связывания комплемента или реакция Вассермана (РВ, RW). Для ее постановки используют сыворотку крови больного сифилисом и спинномозговую жидкость при поражении нервной системы.Методика постановки реакции Вассермана не отличается от техники проведения РСК. Разница лишь в том, что для РО используют не только специфический трепонемный, а неспецифический кардиолипиновый антиген.l Взятие 5-10 мл крови из локтевой вены проводят натощак или не ранее 6 часов после приема пищи. Нельзя брать кровь у больных с повышенной температурой, после употребления алкоголя и жирной пищи, у беременных женщин за 10 дней до родов и рожениц. Добытую из крови сыворотку прогревают при температуре 56 ° С в течение 30 мин для инактивации собственного комплемента. РО обязательно ставят с двумя антигенами: специфическим и неспецифическим.Специфический ультраозвучений трепонемный антиген готовят из культур бледных трепонем (штамм Рейтера), выращенных в пробирках и подверженных действию ультразвука. Его выпускают в виде лиофильно высушенного порошка. Неспецифический кардиолипиновый антиген готовят путем спиртового экстрагирования липидов с бычьего сердца и очистки от балластных смесей, расфасовывают в ампулы по 2 мл. Для введения антигена в РО его титруют согласно данной инструкции. Непосредственно перед постановкой РВ проводят титрование комплемента и гемолитической сыворотки по такой же схеме, как и в РСК. Реакцию Вассермана ставят как качественным, так и количественным методом. Качественную реакцию проводят в трех пробирках с двумя антигенами по обычной схеме.Результаты реакции оценивают по 4 плюсовой системе: положительная реакция - когда есть полная или значительная задержка гемолиза (4 +, 3 +); слабоположительная реакция - частичная задержка гемолиза (2 +); сомнительная реакция - незначительная задержка гемолиза (1 +). В случае возникновения полного гемолиза РО считают отрицательной.Каждую сыворотку, которая дала положительную качественную реакцию, необходимо исследовать и количественным методом с последовательным ее разведением от 1:10 до 1:640.Титром исследуемой сыворотки (титр реагинов) считают то максимальное ее разведение, при котором наступает полная (4 +) или значка (3 +) задержка гемолиза. Количественный метод постановки РО имеет важное значение для оценки эффективности лечения сифилиса. Быстрое снижение титра реагинов указывает на успешную терапию. Если титр сыворотки долго не снижается, это свидетельствует об отсутствии эффективности применяемых препаратов и необходимость изменить тактику лечения.При пилозри на серонегативный первичный сифилис или скрытый, третичный или врожденный, рекомендуют ставить реакцию Вассермана на холоде по той же схеме. В случае подозрения на нейросифилис РО проводят со спинномозговой жидкостью, которую инактивируют, поскольку она не содержит собственного комплемента. В реакцию вводят неразведенный ликвор и в разведениях 1:2 и 1:5.Реакция Вассермана становится положительной через 2-3 недели после появления твердого шанкра. При вторичном сифилисе она выпадает положительной в 100% случаев, в третичном - в 75%.Кроме того, в комплексе серологических реакций (КСР) как скрининг-тест используют микрореакцию преципитации с плазмой крови или инактивированной сывороткой.

Микрореакция преципитации

Микрореакцию преципитации ставят с кардиолипиновым антигеном. Принцип реакции заключается в том, что при добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс антиген-антитело), который осаждается в виде хлопьев белого цвета. Пользуются такой методике: в лунку пластины вносят пипеткой три капли плазмы (или инактивированной сыворотки), затем добавляют одну каплю эмульсии стандартного кардиолипинового антигена. Компоненты реакции смешивают встряхиванием пластины в течение 5 мин, после чего добавляют три капли 0,9% раствора хлорида натрия и оставляют при комнатной температуре еще на 5 мин. Обязательном контроле со слабоположительный сывороткой крови. Результаты оценивают невооруженным глазом над искусственным источником освещения. При появлении в лунке крупных хлопьев реакцию считают положительной (4 +, 3 +), средних и мелких - как слабоположительные (2 +, 1 +). При отрицательном результате преципитат не образуется.Микрореакцию преципитации можно проводить и количественным методом для установления титра преципитирующих антител и оценки на этой основе эффективности лечения. Более высокие титры МРП получают с плазмой, чем с сывороткой. За рубежом аналогом МРП с сывороткой больного является VDRL (Veneral disease research laboratoiy), а с плазмой - RPR (Rapid plasma reagin).

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

К группе специфических реакций, которые широко употребляются для серологической диагностики сифилиса, относится непрямая реакция иммунофлюоресценции. Как антиген, в ней используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из паренхимы яичек кролика на 7-й день после заражения. Реакцию ставят в двух модификациях: РИФ-АБС и РИФ-200. В первом варианте используют сорбент антител (соникат) - ультраозвучений трепонемный антиген для РСК. Его выпускает Каунасское предприятие по производству бактерийных препаратов (Литва). При варианте РИФ-200 сыворотку больного разводят в 200 раз с целью снять влияние групповых протитрепонемних антител.Постановку РИФ-АБС проводят на тонких, хорошо обезжиренных предметных стеклах. На обратной стороне стекол стеклорезом обозначены 10 кружочков диаметром 0,7 см. В рамках кружка на стекло наносят антиген - взвесь бледных трепонем - в таком количестве, чтобы в поле зрения их было 50-60. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем и 10 мин в ацетоне. В отдельную пробирку вносят 0,2 мл сорбента (соникату) и 0,5 мл сыворотки крови больного, хорошо перемешивают. Смесь наносят на мазок (антиген) так, чтобы равномерно его покрыть, выдерживают 30 мин во влажной камере при 3 7 ° С (II фаза реакции). После этого мазок промывают фосфатным буфером, высушивают и наносят на него антишобулинову флуоресцентных сыворотку на 30 мин, ставят во влажную камеру при 37 ° С (II фаза). Препарат вновь промывают фосфатным буфером, высушивают и исследуют под люминесцентным микроскопом.При положительной реакции бледные трепонемы излучают золотисто-зеленый свет, при отрицательной - не светятся.Техника постановки РИФ-200 такое же, как и РИФ-АБС, только сыворотку крови больного предварительно разводят в 200 раз фосфатным буфером. При проведенииреакции иммунофлюоресценции со спинномозговой жидкостью больного сифилисом нервной системы используют РИФ-ц и РИФ-10, т.е. ликвор вводят в реакцию неинактивованим и разведенным, или разведенным 1:10.

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИT)

Реакция имобилизации бледных трепонем (PИT) основан на феномене потери их подвижности в присутствии иммобилизирующие протитрепонемних антител сыворотки больного и комплемента в условиях анаэробиоза. Как антиген в реакции используют взвесь бледных трепонем из тестикулярной ткани кролика, зараженного лабораторным штаммом Никольса. Взвесь разводят стерильным 0,85% раствором хлорида натрия так, чтобы в поле зрения было 10-15 спирохет.Для проведения реакции в стерильной пробирке смешивают 0,05 мл сыворотки крови больного, 0,35 мл антигена и 0,15 мл комплемента. Опыт сопровождают контролями сыворотки, антигена и комплемента. Пробирки помещают в анаеростат, создают анаробни условия и выдерживают в термостате 18-20 ч при температуре 35 ° С. Затем из каждой пробирки готовят препарат надавленные капли, подсчитывают не менее 25 трепонем и отмечают, сколько из них подвижных и сколько неподвижных. Процент специфической иммобилизации бледных трепонем подсчитывают по формуле: х = (А-В) / В * 100, где X - процент иммобилизации, А - число подвижных трепонем в контрольной пробирке, В - число подвижных трепонем в опытной пробирке. Реакция считается положительной, когда процент иммобилизации составляет 50 и более, слабоположительный - от 30 до 50, сомнительной - от 20 до 30 и отрицательной - от 0 до 20.В практических лабораториях используют более простой меланжерний метод PIT за М.М. Овчинниковым. Анаэробные условия опыта создаются помещением реагирующей смеси (сыворотки, антиген, комплемент) в меланжеры, оба конца которого закрывают резиновым кольцом. Меланжерна методика позволяет обойтись без сложного оборудования и аппаратуры для создания анаэробиоза, но дает такие результаты, которые не посту паються классической микроанаеростатний методике.Реакции иммобилизации трепонем и иммунофлуоресценции считают наиболее специфичными в серологической диагностике сифилиса. И все же, PIT, несмотря на ее специфичность, не рекомендуют для использования в широкой практике из-за трудоемкости постановки.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) проводят как с кадриолипиновим антигеном (неспецифическая, отборочная реакция), так и трепонемным (специфическая реакция), которая подтверждает диагноз сифилиса.Принцип непрямого метода ИФА заключается в том, что в антигена, адсорбированного на твердой фазе в лунках планшета вносят исследуемую сыворотку. Если она содержит антитела против трепонем, образуется комплекс антиген-антитело (II фаза). После отмывания несвязанных неспецифических антител в лунки вносят антиглобулинову сыворотку, конъюгированные с ферментом (чаще всего с пероксидазой хрена). Конъюгат прочно присоединяется к комплексу антиген-антитело (II фаза).После отмывания несвязанного конъюгата в лунки добавляют окрашивающий субстрат ОФД - ортофенилендиамин (III фаза). Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя серную кислоту. Для контроля ставят такие же пробы с положительным и заведомо отрицательной сыворотками.Учет результатов анализа проводят с помощью фотометра, который определяет оптическую плотность в двухволновом режиме (492 нм и 620 нм). Для постановки реакции ензиммичених антител, кроме фотометра, нужны одно-и восьмиканальные автоматические пипетки с полипропиленовым наконечником и соответствующие наборы диагностических тест-систем.Метод ИФА находит широкое применение в серологической диагностике сифилиса. Он одинаково эффективен для выявления болезни в инкубационном периоде (через 1-2 недели после инфицирования), при клинических проявлениях болезни и скрытых его формах. Очень часто ИФА используют при скрининговых обследованиях населения, особенно на станциях переливания крови.В лабораторной практике иногда применяют также реакцию иммунной прилипания (РИП) и реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Первая из них основывается на том, что патогенные тестикулярные трепонемы штамма Никольса при смешивании с сывороткой больного в присутствии комплемента и эритроцитов человека прилипают к поверхности красных кровяных телец. РНГА достаточно широко используется для диагностики сифилиса благодаря своей методической простоте. Она становится положительной уже через три недели после заражения. Положительный результат реакции остается годами после выздоровления. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (Treponema pallidum haemoagglutination).

Бледная трепонема (Treponema pallidum) является возбудителем сифилиса. Это венерическое заболевание известно с древних времен, однако его возбудитель был открыт только в 1905 году австрийскими учеными Э. Гоффманом и Ф. Шаудином. Его назвали бледной (pallidum) спирохетой.

Имея очень тонкое спиралевидное тело, бледные трепонемы легко проникают через слизистые оболочки и поврежденные кожные покровы в организм человека чаще при половом контакте, в том числе в извращенной форме, значительно реже — контактным путем или непосредственно с кровью. Бледные трепонемы поражают слизистые оболочки, кожные покровы и внутренние органы. После периода размножения на месте внедрения возбудителей сифилиса образуется первичная сифилома ( , «твердая» язва). Течение заболевания волнообразное и поэтапное.

Специфические после манифестного течения самопроизвольно исчезают, а далее вновь появляются, меняя свою окраску. Длительность рецидивирующего течения заболевания протекает около 2-х лет и является важнейшим признаком раннего сифилиса. Сифилиды, лишенные эпителия, содержат большое количество бледных трепонем. С годами заразность больных сифилисом уменьшается.

Бледная трепонема относится к отряду Spirochaetales, семейству Spirochaetaceae, роду Treponema. Спирохеты обладают уникальным строением и морфологией. Они широко распространены в природе. Это тонкие, довольно длинные, гибкие и подвижные бактерии. Патогенными для человека являются четыре подвида Treponema pallidum:

• Treponema pallidum pallidum вызывает сифилис.
• Treponema pallidum pertenue является причиной фрамбезии (невенерический сифилис, тропическая гранулема).
• Treponema carateum вызывает заболевание пинта.
• Treponema pallidum endemicum является причиной эндемического сифилиса (невенерический сифилис детского возраста, беджел).

Заболевания, вызванные патогенными трепонемами, имеют хроническое волнообразное течение. Сифилис распространен повсеместно, а пинта, фрамбезия и беджел встречаются только в тропических странах и имеют доброкачественное течение.

Рис. 1. Вид бледной трепонемы в электронном микроскопе.

Устойчивость возбудителей во внешней среде

• Бледная трепонема устойчива к низким температурам. До одного года выдерживает замораживание. Хранятся патогенные штаммы возбудителей в бескислородной среде при низких температурах (20 — 70°С) или высушенными из замороженного состояния.
• Трепонемы сохраняют свою вирулентность на предметах окружающей среды до момента высыхания. При температуре до 42°С активность бактерий вначале повышается, а затем они погибают. При нагревании до 60°С трепонемы сохраняют свою активность в течение 15 минут. Более 3-х суток возбудители сифилиса сохраняют свои патогенные свойства в трупном материале.
• Вне организма человека бактерии быстро погибают. При температуре 100°С они погибают мгновенно. Бледные трепонемы чувствительны к дезинфицирующим средствам и некоторым антибиотикам.

Рис. 2. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции.

Возбудители сифилиса в организме больного

В этот период бактерии находятся в очагах поражения и тканевой жидкости в спиралевидной форме, а сам больной становится распространителем инфекции. Особенно заразны больные во вторичном периоде — периоде рецидивного сифилиса. Периоды затихания заболевания связаны с тем, что большая часть трепонем находится внутриклеточно (в фагоцитах). В таком состоянии бактерии не способны размножаться и распространяться по организму.

Бледные трепонемы способны укрываться от негативного воздействия факторов окружающей среды, превращаясь в L-формы и цисты, что объясняет хроническое течение заболевания. На поздних стадиях сифилиса заразность больных минимальная. Общее количество возбудителей снижено. Реакция организма на инфекцию ослаблена.

Рис. 3. Микроскопия мазка, приготовленного методом серебрения. Возбудители сифилиса имеют темную окраску. В желтый цвет окрашены клетки инфицированных тканей.

Характеристика возбудителя: внешнее строение

Бледная трепонема по внешнему виду напоминает штопор. Она имеет 8 — 14 равной величины завитков, высота которых уменьшается на концах. Спиралевидная форма возбудителя сохраняется во всех случаях и при любых условиях. Длина микроорганизма составляет от 5 до 15 мкм, ширина — 0,2 мкм.

Рис. 4. На фото возбудитель сифилиса Treponema pallidum (вид в электронном микроскопе).

«Концевые» образования

Концы у большинства трепонем заострены. На них расположены выросты дискообразной формы (блефаропласты ) с прикрепленными к ним в количестве 10 — 11 фибриллами.

Фибриллы тянуться вдоль тела трепонемы и обвивают его, обеспечивая бактерии спиралевидную форму. С каждого конца отходит по 2 самостоятельных пучка фибрилл. Они располагаются под наружной стенкой, проходя над цитоплазматической мембраной. Под цитоплазматической мембраной также обнаружены фибриллы. Они более тонкие и многочисленные. Фибриллы наружного пучка обеспечивают трепонеме движение, они в два раза толще. Они представляют собой длинные трубочки, состоящие из белка флагелина, достаточно устойчивого к воздействию ряда ферментов. Фибриллы внутреннего слоя играют роль каркаса.

На одном из концов бактерии имеется два округлых образования (губчатое тело ). Оно обеспечивает активное проникновение бактерий в клетки хозяев.

Бледные трепонемы могут осуществлять поступательные (назад и вперед), вращательные, сгибательные, волнообразные (судорожные) и винтообразные движения.

Рис. 5. На фото бледная трепонема (культуральная форма).

Рис. 6. На фото бледные трепонемы с увеличением в 3000 раз (темнопольная микроскопия). Данный вид исследования позволяет регистрировать форму и движение живых бактерий.

Внутреннее строение бледных трепонем (ультраструктура)

Мукопротеидный «чехол»

Тело бактерии окружено слизевидным бесструктурным веществом (микрокапсулой). Эта мукополисахаридная субстанция защищает трепонемы от фагоцитов и антител. Капсульное вещество продуцируется самой трепонемой.

Цитоплазматическая мембрана

Цитоплазматическая мембрана бактерий выполняет ряд жизненно важных функций: транспортную, защитную, является местом локализации антигенов и ферментов, она принимает активное участие в делении клетки, L-трансформации и спорообразовании. Цитоплазматическая мембрана имеет трехслойное строение. Ее внутренний слой образует в протоплазматическом цилиндре многочисленные выросты, за счет чего осуществляется активный перенос извне питательных веществ. От состояния цитоплазматической мембраны зависит жизнедеятельность бактерий.

Протоплазматический цилиндр

Протоплазматический цилиндр находится под наружной стенкой. Структура цитоплазмы бледных трепонем мелкогранулярная. В прозрачную гиалоплазму погружены гранулы-рибосомы и множество пластинчатых структур. Рибосомы обеспечивают синтез белка в бактериальной клетке. В цитоплазме также присутствует нуклеотид, не имеющий ограничительной мембраны. Он тянется по всей длине протоплазматического цилиндра.

Мезосомы

Мезосомы являются производными цитоплазматической мембраны. Они занимают половину или целую ось поперечника трепонемы. Мезосомы снабжают энергией бактериальную клетку в точках усиленного роста при спорообразовании и делении. Их функция аналогична митохондриям. Мезосомы различаются по характеру строения, но количество их всегда очень большое.

Рис. 7. Ультраструктура бледной трепонемы. Мукопротеидный чехол сверху, далее трехслойная клеточная стенка, внутри — цитоплазматическая мембрана и цилиндр с нуклеотидом, мезосомами, рибосомами и другими включениями. На фото хорошо просматриваются фибриллы, идущие вдоль тела бактерии.

Размножение бледных трепонем

Размножение возбудителей сифилиса происходит путем поперечного деления. Деление бактериальной клетки длится около 33 часов и происходит только при температуре около 37 °C. Иногда бледные трепонемы делятся сразу на несколько частей.

Рис. 8. На фото бледные трепонемы.

Формы существования возбудителей сифилиса

В неблагоприятных условиях (воздействие антибиотиков, антител, физических и химических факторов окружающей среды, истощение питательной среды) бактерии трансформируются в L-формы, распадаются на зерна, образуют цисты и кокковые формы. В таких формах трепонемы могут длительно существовать в организме больного, а потом реверсировать, обуславливая рецидив сифилиса.

Бледные трепонемы в L-форме способны проникать в организм человека даже при отсутствии повреждений на коже и слизистых оболочках, проходят через фильтры, которые применяются при обработке кожи.

При заражении цист-формами бактерий отмечается удлинение инкубационного периода, возникновение скрытых форм заболевания и развитие устойчивости к антибактериальным препаратам.

Цисты

Неблагоприятные условия существования приводят к тому, что бледная трепонема превращается в цисту. Она сворачивается в клубок, а вокруг образуется бесструктурная прозрачная оболочка (чехол), состоящий иногда из нескольких слоев. Все морфологические элементы возбудителя при этом сохраняются. Существование цист покоя объясняет существование скрытых форм заболевания, длительное и вялое течение, устойчивость к антибактериальным препаратам. По мере давности заболевания количество цист увеличивается. Исследователями доказано, что цистообразование — это защитная реакция, обеспечивающая выживание и размножение возбудителей сифилиса.

L-формы

В L-формы трепонемы превращаются под воздействием целого ряда факторов. Трепонемы приобретают шаровидную форму, из-за блокировки синтеза истончается клеточная стенка, приостанавливается размножение, но сохраняется рост и интенсивность синтеза ДНК. В цитоплазме L-форм бактерий определяется гигантский нуклеотид, внутри которого находится большое количество нитей, содержащих ДНК.

• Спиралевидные формы бледных трепонем преобладают на ранних стадиях сифилиса. В этот период бактерии располагаются внеклеточно, интенсивно делятся, что делает их уязвимым к действию антибиотиков.
• Во вторичном периоде рецидивного сифилиса трепонемы располагаются не только внеклеточно, но и внутри фагоцитов, обнаруживается большое количество цист, более устойчивых к лечению.
• На поздних стадиях заболевания отмечается значительное снижение спиралевидных форм трепонем, увеличение числа цист и L-форм. Общее количество возбудителей снижено. Реакция организма ослаблена.

Рис. 9. Хорошо просматриваются бактерии в мазках, приготовленных методом импрегнации серебром (методика Левадити).

Бледные трепонемы под микроскопом

В цитоплазме возбудителей сифилиса находится большое количество гидрофобных компонентов, из-за чего они плохо прокрашиваются анилиновыми красителями. По методу Романовского-Гимзы бактерии окрашиваются в бледно-розовый цвет, за что получили название «бледные трепонемы».

• Хорошо просматриваются трепонемы с помощью фазово-контрастной (темнопольной) микроскопии. В свежеприготовленном мазке с живыми возбудителями в темном поле видны плавно изгибающиеся спиралевидные бактерии. От сапрофитных спирохет, которые встречаются в полости рта и на слизистых оболочках половых органов, бледные трепонемы отличаются равномерностью завитков, они более тонкие, осуществляют плавные волнообразные движения и способны сгибаться под углом.
• Хорошо просматриваются бактерии в мазках, приготовленных методом импрегнации серебром (методика Левадити). Трепонемы окрашиваются в черный цвет и хорошо видны на фоне окрашенных в желтый цвет клеток исследуемых тканей. Серебро осаждается на бактериальных клетках, увеличивая их диаметр.
• Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции. Бактерии в мазке, обработанные люминесцирующей сывороткой, светятся в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа.

Рис. 10. На фото бледные трепонемы под микроскопом: импрегнация серебром (фото слева), микроскопия в темном поле (фото посередине), реакция иммунофлюоресценции (фото справа).

Культуральные свойства возбудителей сифилиса

Бледные трепонемы являются облигатными анаэробами — живут и растут в условиях отсутствия молекулярного кислорода. Бактерии практически не растут на искусственных питательных средах. Для их выращивания используются среды, содержащие лошадиную и кроличью сыворотки, на которых бледные трепонемы растут медленно и теряют вирулентные свойства. Рост происходит при температуре 35 0 С. Колонии возбудителей сифилиса появляются на 3 — 5 (на некоторых средах на 7 — 9) сутки.

Рис. 11. На фото рост колоний бледных трепонем.

Биохимические свойства бледных трепонем

Биохимические свойства возбудителей сифилиса изучены мало. Ряд штаммов продуцируют сероводород и индол. Некоторые штаммы разжижают желатин, другие — глюкозу, сахарозу, галактозу и мальтозу с образованием кислоты. Некоторые штаммы разлагают только глюкозу. Несколько штаммов возбудителей подвергают гемолизу эритроциты человека.

Рис. 12. На фото бледные трепонемы. Вид в электронном микроскопе.

Или бледная трепонема это микроорганизм в виде спирали с 8-12 завитков, который имеет клетчатую мембрану, благодаря чему определенный период времени может не терять своей патогенности под влиянием факторов окружающей среды.

Бактерия относится к спирохетам и является возбудителем такого заболевания, как сифилис.

Характеризующие особенности возбудителя

Попав в окружающую среду со слюной, спермой или выделениями из эрозий и язв больного, бледная трепонема способна сохранять свою активность до тех пор, пока не произойдет высыхание вещества, в котором трепонема пребывает.

Возбудитель устойчив к действию высоких температур, 54 градуса выше нуля уничтожают возбудителя только через 15 минут, более высокие цифры становятся пагубными для трепонемы паллидум быстрее. Даже во время кипячения возбудитель не теряет своей активности в течение нескольких секунд. Интересным фактом является то, что при температуре 42 градуса трепонема становится более активной и лишь со временем погибает. Возбудитель сифилиса считается патогенным в течение трех суток, даже если находится в трупном материале.

Высоким уровнем устойчивости обладает бледная спирохета и к воздействию низких температурных показателей, даже в замороженном виде она сохраняет свою патогенность в течение 12 месяцев. Лучшими условиями проживания возбудителя является бескислородная среда и низкая температура.

Бледная трепонема погибает под воздействием дезинфицирующих и некоторых видов антибактериальных средств. Неблагоприятными для бледной спирохеты (приводят к ее гибели) являются:

• мышьяк и висмут;
• пенициллин;
• ртуть;
• влияние кислот и щелочей;
• попадание на микроорганизм света и ультрафиолетового облучения;
• антисептические растворы.

Однако выводы проведенных исследований по устойчивости возбудителя сифилиса к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды указывают на то, что трепонема в некоторых случаях все же может сохранять свою активность и вызывать заболевание даже при проникновении к ней кислорода, при высушивании и попадании лучей света.

Пути передачи

Входными воротами, через которые проникает возбудитель в наш организм, считается травмированная тканевая поверхность слизистых оболочек ротовой полости или половых органов.

Передача бледной трепонемы происходит:

• Половым путем — при незащищенных половых отношениях с больным.
• Бытовым — в результате использования загрязненных полотенец, белья, косметических средств.
• Трансплацентарным — от больной матери к ребенку.
• Вертикальным — при прохождении ребенка через инфицированные родовые пути матери.
• Гематогенным — при проведении переливания крови и ее компонентов, при оперативных вмешательствах, использовании общего шприца с больным человеком (особенно характерно для наркоманов).

Необходимо заметить, что достаточно высокий риск инфицирования у работников медицинских и косметических заведений, особенно если они осуществляют проведение процедур, связанных с нарушением целостности кожного покрова.

Наибольшее количество случаев заражения диагностируется у лиц, имеющих беспорядочную половую жизнь и не использующих контрацептивов.

Клинические проявления болезни

Обратите внимание, высокий уровень заразности наблюдается у больных при первичном и вторичном сифилисе, который проявляется формированием на кожном покрове и слизистых половых органов первых проявлений болезни. Именно в данный период времени происходит интенсивное размножение и выделение в окружающее пространство бледной трепонемы.

В наше время растет количество больных, у которых сифилис проявляется экстрагенитальными шанкрами, которые локализуются на слизистой оболочке рта, глотки, ануса. Элементы сыпи могут наблюдаться на лице, а сифилиды на ладонной поверхности рук и подошвах.

Сифилис врожденного генеза, как уже отмечалось, формируется в результате заражения ребенка от больной матери еще во время пребывания в ее утробе. Характеризуется присутствием таких патологических симптомов как: врожденная глухота, кератит, гетчисоновые зубы.

Диагностика

Перед тем, как начать лечить больного, врач для постановки верного диагноза и назначения эффективной терапии проводит осмотр пациента и сбор анамнестических данных, а также назначает проведение:

• Микроскопического и бактериоскопического обследования мазка взятого с поверхности шанкра (материалом является тканевый экссудат) или биопсийного материала лимфатического узла (но только в первый месяц заболевания). Для лучшей информативности мазка поверхности язв и эрозий предварительно смазывают физраствором, проводят забор материала и готовят препарат для микроскопического исследования. Проводится окраска материала по Романовскому-Гимзе, бледная трепонема при этом приобретает розовый оттенок. Необходимо акцентировать внимание на том, что живые бледные трепонемы в неокрашенном мазке не выявляются под световым микроскопом. В таком случае оправданным считается использование темнопольной или фазоконтрасной микроскопии. Трепонема обладает способностью приводить к преломлению лучей света и выглядит как спиралевидная полоска белого цвета.
• Серологических реакций, целью которых является диагностирование антител к возбудителю сифилиса в плазме крови. Чаще всего проводят реакцию Вассермана и реакцию быстрых плазменных реагентов. Данные исследования считаются обязательными и применяются даже при осуществлении медицинского осмотра с профилактической целью в поликлинических медицинских учреждениях.
• Реакции иммунофлюоресценции, гемагглютинации, иммобилизации трепонем. Данные исследования отличаются чрезвычайно высоким уровнем чувствительности и точности. Позволяют выявить в крови человека антитела. Например, IgM свидетельствуют о наличии острого воспалительного процесса, IgG указывают на хроническое течение болезни.
• Иммуноферментного анализа. Этот метод обследования, как и предыдущие, помогает диагностировать наличие антител к бледной трепонеме. После того, как пройдет 14 дней, в плазме крови начинают проявляться IgM и IgA, а через месяц — IgG (особенностью является то, что именно в этот период их количество находится на пике, с течением времени оно уменьшается).
• ПЦР диагностики.

Лечение

При появлении патологических симптомов необходимо обратиться к дерматологу. Лечащий доктор проведет тщательное обследование пациента и назначит индивидуальную схему лечения, которая будет зависеть от тяжести клинических проявлений сифилиса и физиологических особенностей больного. Необходимо заметить, что правильное, полноценное лечение приводит к полному выздоровлению.

Основным направлением лечебной терапии считается уничтожение бледной трепонемы. С этой целью больным назначают антибактериальные препараты в немалых дозах. В большей части случаев применяются препараты из группы:

• пенициллинов — Бензилпенициллин;
• тетрациклинов — Доксациклин;
• макролидов — Кларитромицин или Сумамед;
• цефалоспоринов — Цефазолин;
• фторхинолонов — Ципрофлоксацин.

Важно! Продолжительность приема лекарств должна составлять не менее двух месяцев.

Параллельно с антибиотикотерапией назначают:

• иммуностимуляторы;
• витаминно-минеральные комплексы;
• пробиотики;
• физиотерапевтические процедуры.

Половой партнер больного также в обязательном порядке должен проходить лечение, это позволит предупредить риск повторного заражения. Важным нюансом, который требует особого внимания, считается то, что на период лечения категорически запрещается вести половую жизнь.

Определение эффективности лечения сифилиса считается довольно непростым делом. Объясняется это тем, что практически все клинические проявления болезни исчезают уже при проведении части лечения, но это еще не является подтверждением того, что бледная спирохета погибла. Чтобы узнать вылечился ли больной, необходимо назначить прохождение серологических исследований.

К лечению болезни необходимо относиться со всей ответственностью, ведь она считается асоциальной и может становиться причиной тяжелых осложнений и даже летального исхода.

Меры профилактики

Для того, чтобы предотвратить попадание бледной трепонемы в организм, необходимо:

• С особым вниманием следить за личной гигиеной.
• Пользоваться только своим бельем.
• Использовать индивидуальные косметические средства.
• Избегать случайных половых связей. Если же незащищенные отношения все же произошли, нужно как можно скорее провести обработку половых органов раствором Альбуцида или Хлоргексидина от которых бледная спирохета погибает.
• Пользоваться барьерными средствами контрацепции.

В обязательном порядке профилактическое проводится:

• донорам;
• женщинам в период вынашивания ребенка;
• лицам, профессия которых связана с пищевой промышленностью;
• учителям и воспитателям детских садов;
• медицинским работникам;
• лицам, поступающим на лечение в стационар.

Подведя итог, необходимо отметить, что благодаря развитию фармацевтической отрасли и применению антибактериальной терапии прогноз сифилиса считается благоприятным. Все что необходимо, это лишь пройти правильное лечение и соблюдать все рекомендации врача. Ни в коем случае не занимайтесь самолечением, ведь это может привести к очень плачевным последствиям.

Вот практически и вся информация о том, что такое бледная трепонема и сифилис, и как необходимо лечить данное патологическое состояние. Надеемся, она будет для вас полезной и поможет разобраться с волнующими вопросами.